| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词 | 第10-16页 |
| 绪论 | 第16-20页 |
| 第一部分: IL-17A促进软骨细胞分解代谢加速骨关节炎进展 | 第20-54页 |
| 1 IL-17A在骨关节炎患者滑膜中表达差异的研究 | 第22-26页 |
| 1.1 引言 | 第22页 |
| 1.2 实验试剂与仪器 | 第22-23页 |
| 1.2.1 实验材料和仪器 | 第22-23页 |
| 1.2.2 相关试剂的配制 | 第23页 |
| 1.3 实验方法 | 第23-25页 |
| 1.3.1 滑膜及软骨样本准备 | 第23页 |
| 1.3.2 组织免疫荧光染色 | 第23-24页 |
| 1.3.3 组织免疫组化染色 | 第24-25页 |
| 1.4 实验结果 | 第25-26页 |
| 1.4.1 存在一类滑膜中IL-17A表达异常升高的骨关节炎患者 | 第25-26页 |
| 2 肠道微生物通过调控IL-17A水平影响骨关节炎进展的研究 | 第26-39页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验试剂与仪器 | 第26-28页 |
| 2.2.1 材料和试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.2 实验仪器及材料 | 第27页 |
| 2.2.3 相关试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.2.4 实验动物 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-33页 |
| 2.3.1 抗生素处理 | 第28页 |
| 2.3.2 肠道微生物组重建 | 第28页 |
| 2.3.3 小鼠骨关节炎DMM造模 | 第28-29页 |
| 2.3.4 动物分组 | 第29页 |
| 2.3.5 膝关节样本制备 | 第29页 |
| 2.3.6 Safarinin O & Fastgreen染色 | 第29-30页 |
| 2.3.7 骨关节炎OARSI评分 | 第30页 |
| 2.3.8 H&E染色 | 第30-31页 |
| 2.3.9 滑膜炎症评分 | 第31页 |
| 2.3.10 小鼠肠道微生物DNA获取 | 第31页 |
| 2.3.11 实时荧光定量PCR (Real time PCR) | 第31-32页 |
| 2.3.12 小鼠肠道微生物组16S rRNA测序 | 第32页 |
| 2.3.13 扫描电镜 | 第32-33页 |
| 2.3.14 统计方法 | 第33页 |
| 2.4 实验结果 | 第33-39页 |
| 2.4.1 缺乏肠道微生物SFB定植小鼠骨关节炎进展减缓 | 第33-35页 |
| 2.4.2 抗生素抑制肠道微生物后减缓小鼠骨关节炎进展 | 第35-37页 |
| 2.4.3 抑制肠道微生物SFB定植减缓骨关节炎进展 | 第37-39页 |
| 3 IL-17A促进软骨细胞分解代谢加速软骨降解的机制研究 | 第39-45页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验试剂与仪器 | 第39-40页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.2 实验仪器及材料 | 第40页 |
| 3.2.3 相关试剂和材料的配置参照前文 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.3.1 小鼠原代软骨细胞的分离和培养 | 第40页 |
| 3.3.2 细胞冻存 | 第40页 |
| 3.3.3 细胞复苏 | 第40-41页 |
| 3.3.4 细胞蛋白样本准备 | 第41页 |
| 3.3.5 Western Blot | 第41-42页 |
| 3.3.6 小鼠骨关节炎造模 | 第42页 |
| 3.3.7 小鼠关节腔注射IL-17A | 第42页 |
| 3.4 实验结果 | 第42-45页 |
| 3.4.1 IL-17A促进软骨细胞分解代谢加速骨关节炎进展 | 第42-45页 |
| 4 IL-17A水平特异性升高的转基因小鼠骨关节炎进展的研究 | 第45-51页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验试剂与仪器 | 第45-46页 |
| 4.2.1 材料和试剂 | 第45-46页 |
| 4.2.2 实验仪器及材料 | 第46页 |
| 4.2.3 实验动物 | 第46页 |
| 4.2.4 相关试剂的配制 | 第46页 |
| 4.2.5 其他相关试剂和材料的配置参照前文 | 第46页 |
| 4.3 实验方法 | 第46-47页 |
| 4.3.1 胚胎全骨骼染色 | 第46页 |
| 4.3.2 小鼠胚胎样本制作 | 第46页 |
| 4.3.3 小鼠OA造模及分组 | 第46-47页 |
| 4.3.4 关节腔注射IL-17A抗体 | 第47页 |
| 4.4 实验结果 | 第47-51页 |
| 4.4.1 MINK1敲除后对软骨发育影响的研究 | 第47-48页 |
| 4.4.2 MINK1-/-转基因小鼠骨关节炎进展加快 | 第48-50页 |
| 4.4.3 关节腔注射IL-17A抗体减缓MINK1敲除小鼠骨关节炎进展 | 第50-51页 |
| 第一部分 讨论 | 第51-54页 |
| 第二部分: Kdm6b调控软骨细胞合成代谢维持软骨稳态 | 第54-88页 |
| 5 Kdm6b调控软骨发育的作用和机制研究 | 第55-64页 |
| 5.1 引言 | 第55-56页 |
| 5.2 实验试剂与仪器 | 第56-57页 |
| 5.2.1 材料和试剂 | 第56-57页 |
| 5.2.2 实验仪器及材料 | 第57页 |
| 5.2.3 实验动物 | 第57页 |
| 5.2.4 相关试剂的配制 | 第57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57-58页 |
| 5.3.1 胚胎软骨特异性敲除Kdm6b | 第57页 |
| 5.3.2 基因型鉴定 | 第57-58页 |
| 5.3.3 胚胎全骨骼染色 | 第58页 |
| 5.3.4 BrdU | 第58页 |
| 5.3.5 细胞凋亡检测(TUNEL) | 第58页 |
| 5.4 实验结果 | 第58-64页 |
| 5.4.1 Kdm6b在成软骨诱导和胚胎软骨发育中的表达升高 | 第58-60页 |
| 5.4.2 软骨细胞特异性敲除Kdm6b致胚胎软骨发育异常 | 第60-62页 |
| 5.4.3 软骨细胞特异性敲除Kdm6b抑制软骨细胞的增殖 | 第62-64页 |
| 6 Kd m6b调控软骨细胞合成代谢的功能和机制研究 | 第64-72页 |
| 6.1 引言 | 第64页 |
| 6.2 实验试剂与仪器 | 第64-65页 |
| 6.2.1 材料和试剂 | 第64-65页 |
| 6.2.2 实验仪器及材料 | 第65页 |
| 6.2.3 相关试剂的配制同上文 | 第65页 |
| 6.3 实验方法 | 第65-67页 |
| 6.3.1 原代软骨细胞培养及Kdm6b敲除 | 第65-66页 |
| 6.3.2 RNA提取 | 第66页 |
| 6.3.3 逆转录合成cDNA | 第66-67页 |
| 6.3.4 膝关节样本制备 | 第67页 |
| 6.3.5 转录组测序 | 第67页 |
| 6.3.6 ChIP-qPCR | 第67页 |
| 6.4 实验结果 | 第67-72页 |
| 6.4.1 软骨细胞特异性敲除Kdm6b的老龄小鼠膝关节软骨产生自发损伤 | 第67-70页 |
| 6.4.2 Kdm6b直接调控软骨细胞合成代谢相关基因的表达 | 第70-72页 |
| 7 Kdm6b在骨关节炎病理过程中的作用和机制研究 | 第72-81页 |
| 7.1 引言 | 第72页 |
| 7.2 实验试剂与仪器 | 第72-73页 |
| 7.2.1 材料和试剂 | 第72页 |
| 7.2.2 实验仪器及材料 | 第72页 |
| 7.2.3 实验动物 | 第72-73页 |
| 7.2.4 相关溶液的配制同前文 | 第73页 |
| 7.3 实验方法 | 第73-74页 |
| 7.3.1 动物实验分组 | 第73页 |
| 7.3.2 骨软骨缺损模型 | 第73-74页 |
| 7.3.3 骨软骨缺损修复评分 | 第74页 |
| 7.4 实验结果 | 第74-81页 |
| 7.4.1 软骨细胞特异性敲除Kdm6b加速小鼠骨关节炎进展 | 第74-77页 |
| 7.4.2 Kdm6b敲除抑制软骨细胞合成代谢加速骨关节炎进展 | 第77-79页 |
| 7.4.3 Kdm6b对骨关节炎病理过程中关节滑膜和软骨下骨作用的研究 | 第79-81页 |
| 8 Kdm6b与骨关节炎软骨损伤临床相关性的研究 | 第81-85页 |
| 8.1 引言 | 第81页 |
| 8.2 实验试剂与仪器 | 第81页 |
| 8.2.1 材料和试剂 | 第81页 |
| 8.2.2 实验仪器及材料同上文 | 第81页 |
| 8.2.3 相关溶液的配制同上文 | 第81页 |
| 8.3 实验方法 | 第81-82页 |
| 8.3.1 人正常关节软骨样本和OA软骨样本准备 | 第81-82页 |
| 8.4 实验结果 | 第82-85页 |
| 8.4.1 Kdm6b在小鼠和人骨关节炎软骨中表达水平下降 | 第82-84页 |
| 8.4.2 Kdm6b参与软骨细胞对骨关节炎炎症刺激的应答 | 第84-85页 |
| 第二部分 讨论 | 第85-88页 |
| 9 总结 | 第88-93页 |
| 9.1 调控肠道微生物抑制IL-17A减缓骨关节炎进展的效研究 | 第88-90页 |
| 9.2 Kdm6b调控软骨细胞合成代谢维持骨关节炎中软骨稳态的研究 | 第90-93页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 综述 | 第99-122页 |
| 参考文献 | 第112-122页 |
| 作者简历 | 第122-123页 |
