| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 橘小实蝇概述 | 第10-11页 |
| 2 昆虫精子发生过程研究概述 | 第11-15页 |
| 2.1 精子发生过程 | 第11-12页 |
| 2.2 精子发生过程相关基因的研究 | 第12-14页 |
| 2.3 gld2、tim、rae1、gudu基因研究进展 | 第14-15页 |
| 3 RNAi技术的研究进展 | 第15-17页 |
| 3.1 RNAi的概述 | 第15-16页 |
| 3.2 RNAi作用机制 | 第16-17页 |
| 4 昆虫摄取ds RNA的方法 | 第17-19页 |
| 4.1 微量注射 | 第17-18页 |
| 4.2 饲喂 | 第18页 |
| 4.3 其他 | 第18-19页 |
| 5 本研究的目的意义和创新点 | 第19-20页 |
| 5.1 目的意义 | 第19页 |
| 5.2 创新点 | 第19-20页 |
| 6 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 橘小实蝇gld2、tim、rae1、gudu基因片段克隆 | 第21-41页 |
| 1 前言 | 第21-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-28页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第22页 |
| 2.1.2 仪器和设备 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂的配置 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 反转录合成c DNA第一链 | 第24页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.2.4 PCR反应扩增精子发生相关基因gld2、tim、rae1、gudu片段 | 第25-26页 |
| 2.2.5 PCR产物的回收与纯化 | 第26页 |
| 2.2.6 目的片段与载体连接 | 第26-27页 |
| 2.2.7 转化 | 第27页 |
| 2.2.8 阳性克隆鉴定和测序 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-39页 |
| 3.1 橘小实蝇总RNA的提取 | 第28页 |
| 3.2 gld2、tim、rae1、gudu基因片段的克隆 | 第28-31页 |
| 3.2.1 PCR扩增gld2、tim、rae1、gudu基因片段 | 第28-29页 |
| 3.2.2 阳性克隆的筛选 | 第29-31页 |
| 3.3 测序结果与分析 | 第31-39页 |
| 3.3.1 橘小实蝇gld2基因序列分析 | 第31-33页 |
| 3.3.2 橘小实蝇tim基因序列分析 | 第33-35页 |
| 3.3.3 橘小实蝇rae1基因序列分析 | 第35-38页 |
| 3.3.4 橘小实蝇gudu基因序列分析 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 橘小实蝇精子发生相关基因饲喂法沉默对生殖的影响 | 第41-56页 |
| 1 前言 | 第41页 |
| 2 材料和方法 | 第41-47页 |
| 2.1 材料 | 第41-42页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第41页 |
| 2.1.2 仪器和设备 | 第41页 |
| 2.1.3 主要试剂及常用试剂的配制 | 第41-42页 |
| 2.2 方法 | 第42-47页 |
| 2.2.1 HT115感受态细胞的制作 | 第42-43页 |
| 2.2.2 原核表达载体的构建 | 第43-45页 |
| 2.2.3 诱导表达ds RNAs | 第45页 |
| 2.2.4 饲喂处理检测RNAi对橘小实蝇的干扰效应 | 第45-46页 |
| 2.2.5 q-PCR检测RNAi沉默后基因表达量的变化 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-54页 |
| 3.1 目的基因的扩增 | 第47页 |
| 3.2 表达载体的筛选与鉴定 | 第47-49页 |
| 3.3 ds RNA的诱导表达 | 第49-50页 |
| 3.4 RNAi沉默对橘小实蝇生殖的影响 | 第50-54页 |
| 3.4.1 ds RNA处理对雄虫死亡率的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.2 ds RNA处理对雄虫交配能力的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.3 处理后雄虫与雌虫交配对雌虫产卵量的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.4 处理后的雄虫与雌虫交配对雌虫卵孵化的影响 | 第53-54页 |
| 3.5 q-PCR检测RNAi沉默后基因表达量的变化 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 橘小实蝇精子发生相关基因注射法沉默对生殖的影响 | 第56-68页 |
| 1 前言 | 第56页 |
| 2 材料与方法 | 第56-60页 |
| 2.1 材料 | 第56-57页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第56页 |
| 2.1.2 仪器和设备 | 第56页 |
| 2.1.3 主要试剂及常用试剂的配制 | 第56-57页 |
| 2.2 方法 | 第57-60页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第57页 |
| 2.2.2 模板的制备 | 第57-58页 |
| 2.2.3 ds RNA的体外合成与纯化 | 第58-59页 |
| 2.2.4 注射处理检测RNAi对橘小实蝇的干扰效应 | 第59-60页 |
| 2.2.5 q-PCR检测RNAi沉默后基因表达量的变化 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-66页 |
| 3.1 PCR扩增含有T7启动子的DNA片段 | 第60-61页 |
| 3.2 体外合成ds RNA | 第61-62页 |
| 3.3 注射法沉默对橘小实蝇生殖的影响 | 第62-65页 |
| 3.3.1 ds RNA注射处理对雄虫死亡率的影响 | 第62页 |
| 3.3.2 ds RNA处理对雄虫交配能力的影响 | 第62-63页 |
| 3.3.3 处理后雄虫与雌虫交配对雌虫产卵量的影响 | 第63-64页 |
| 3.3.4 处理后的雄虫与雌虫交配对雌虫卵孵化的影响 | 第64-65页 |
| 3.4 q-PCR检测RNAi沉默后基因表达量的变化 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 总结与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
