| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 符号说明 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-46页 |
| 1.植物转基因方法研究进展 | 第15-22页 |
| ·载体介导转化法 | 第15-17页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第15-16页 |
| ·植物病毒介导转化法 | 第16-17页 |
| ·DNA直接导入法 | 第17-22页 |
| ·原生质体直接转化法 | 第17-18页 |
| ·电激法 | 第18-19页 |
| ·基因枪转化法 | 第19页 |
| ·微注射法 | 第19-20页 |
| ·离子束介导法 | 第20-21页 |
| ·花粉管通道法 | 第21-22页 |
| 2.无抗性选择标记转基因植物研究进展 | 第22-31页 |
| ·回避策略 | 第23-26页 |
| ·不使用标记基因直接筛选法 | 第23页 |
| ·安全性标记基因的利用 | 第23-25页 |
| ·目的基因作为筛选标记 | 第25-26页 |
| ·剔除策略 | 第26-31页 |
| ·标记基因的分离剔除法 | 第26-27页 |
| ·标记基因的重组剔除法 | 第27-31页 |
| ·小结与展望 | 第31页 |
| 3.果实成熟的基因工程研究进展 | 第31-34页 |
| ·番茄果实成熟的基因工程研究 | 第31-33页 |
| ·番茄成熟相关的细胞壁水解酶基因工程研究 | 第31-33页 |
| ·番茄果实乙烯合成及其信号转导相关因子的基因工程研究 | 第33页 |
| ·其它鲜果成熟的分子生物学研究进展 | 第33-34页 |
| 4.本研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-46页 |
| 第二章 甜瓜果实发育成熟相关基因的克隆及其表达特性分析 | 第46-67页 |
| 1.材料和试剂 | 第47-48页 |
| ·植物材料 | 第48页 |
| ·菌种质粒 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| 2.实验方法 | 第48-54页 |
| ·甜瓜果实总RNA的提取 | 第48-49页 |
| ·引物设计与合成 | 第49-50页 |
| ·克隆引物的设计与合成 | 第49-50页 |
| ·实时定量PCR检测引物的设计与合成 | 第50页 |
| ·各基因全长cDNA序列的克隆 | 第50-53页 |
| ·反转录反应 | 第50-51页 |
| ·cDNA序列的PCR扩增 | 第51页 |
| ·PCR产物纯化 | 第51页 |
| ·连接反应 | 第51-52页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第52页 |
| ·转化子的筛选与测序 | 第52-53页 |
| ·甜瓜果实不同发育成熟阶段各基因的表达特性分析 | 第53-54页 |
| 3.结果与分析 | 第54-62页 |
| ·RNA的分析 | 第54页 |
| ·RT-PCR产物分析 | 第54-55页 |
| ·重组cDNA克隆的筛选鉴定 | 第55-59页 |
| ·重组质粒的快速提取法筛选 | 第55-56页 |
| ·重组质粒的菌体PCR检测 | 第56-57页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第57-59页 |
| ·序列分析 | 第59-61页 |
| ·甜瓜果实不同发育成熟阶段各基因的表达特性分析 | 第61-62页 |
| 4.讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 第三章 甜瓜的遗传转化 | 第67-81页 |
| 1.材料和试剂 | 第68页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·菌种质粒 | 第68页 |
| ·主要试剂 | 第68页 |
| 2.实验方法 | 第68-73页 |
| ·引物设计与合成 | 第68-69页 |
| ·表达载体构建的引物设计 | 第68-69页 |
| ·检测引物的设计 | 第69页 |
| ·无选择标记反义ACS1、AC01表达载体的构建 | 第69-71页 |
| ·35S-nos片段的获得 | 第69-70页 |
| ·无选择标记pPZP201表达载体的构建 | 第70页 |
| ·无选择标记反义ACS1、AC01表达载体的构建 | 第70-71页 |
| ·用于转化的反义ACS1、AC01线性表达盒的获得 | 第71-72页 |
| ·甜瓜的遗传转化 | 第72页 |
| ·转化植株的检测 | 第72-73页 |
| ·甜瓜总DNA的提取 | 第72-73页 |
| ·转反义ACS1和AC01基因转化植株的PCR检测 | 第73页 |
| 3.结果与分析 | 第73-79页 |
| ·无选择标记pPZP201表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·无选择标记反义ACS1、AC01表达载体的构建 | 第74-76页 |
| ·用于转化的反义ACS1、AC01线性表达盒的获得 | 第76页 |
| ·转反义ACS1、AC01基因To代植株的PCR检测 | 第76-79页 |
| 4.讨论 | 第79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 第四章 转基因耐贮藏甜瓜的选育 | 第81-94页 |
| 1.材料和试剂 | 第81-82页 |
| ·植物材料 | 第81-82页 |
| ·试剂 | 第82页 |
| 2.实验方法 | 第82-86页 |
| ·引物设计与合成 | 第82页 |
| ·T_0代转基因耐贮藏甜瓜植株的筛选 | 第82-83页 |
| ·T_1代转基因耐贮藏甜瓜植株的筛选 | 第83页 |
| ·T_2代转基因耐贮藏甜瓜株系的获得 | 第83-84页 |
| ·生理指标分析 | 第84页 |
| ·反义基因表达的检测 | 第84-85页 |
| ·转反义AC01基因甜瓜植株农艺学性状的分析 | 第85页 |
| ·转反义AC01基因甜瓜植株花器官某些性状的测定 | 第85-86页 |
| ·花粉总量及花粉萌发率的测定 | 第85页 |
| ·两性花着生节位测定 | 第85-86页 |
| ·花梗脱落性实验 | 第86页 |
| 3. 结果与分析 | 第86-93页 |
| ·耐贮藏甜瓜果实的选育 | 第86-87页 |
| ·T_2代植株外源基因遗传稳定性的检测 | 第87-88页 |
| ·生理指标分析 | 第88-89页 |
| ·反义基因表达的检测 | 第89-90页 |
| ·转反义AC01基因甜瓜植株植物农艺学性状的分析 | 第90-91页 |
| ·转反义AC01基因甜瓜植株花器官某些性状的测定 | 第91-93页 |
| ·花粉总量及花粉萌发率的统计 | 第91-92页 |
| ·两性花着生节位特性 | 第92页 |
| ·花梗脱落性 | 第92-93页 |
| 4. 讨论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-97页 |
| 结论 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 攻读博士学位期间论文发表情况 | 第99页 |
