构建含镍铁氢酶基因的重组大肠杆菌及产氢研究
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 引言 | 第11-13页 |
| 1.2 生物制氢研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 光发酵生物制氢研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.2 暗发酵生物制氢研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3 大肠杆菌产氢研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4 沼泽红假单胞菌镍铁氢酶 | 第18-19页 |
| 1.5 论文研究内容 | 第19页 |
| 1.6 论文研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第2章 沼泽红假单胞菌镍铁氢酶的克隆 | 第21-35页 |
| 2.1 试剂与仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22页 |
| 2.2 培养基配方 | 第22-23页 |
| 2.2.1 RCVBN培养基 | 第22-23页 |
| 2.2.2 LB培养基 | 第23页 |
| 2.3 方法 | 第23-28页 |
| 2.3.1 沼泽红假单胞菌的分离鉴定 | 第23-25页 |
| 2.3.2 沼泽红假单胞菌镍铁氢酶的克隆 | 第25-28页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第28-35页 |
| 2.4.1 沼泽红假单胞菌 | 第28-29页 |
| 2.4.2 16S rDNA基因序列分析 | 第29-30页 |
| 2.4.3 镍铁氢酶大小亚基基因的克隆 | 第30-31页 |
| 2.4.4 含镍铁氢酶基因的大肠杆菌的筛选 | 第31页 |
| 2.4.5 镍铁氢酶大小亚基测序结果 | 第31-34页 |
| 2.4.6 小结与讨论 | 第34-35页 |
| 第3章 产氢大肠杆菌的构建及筛选 | 第35-49页 |
| 3.1 试剂与仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.1 主要试剂和菌种 | 第35-36页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第36页 |
| 3.2 培养基配方 | 第36-38页 |
| 3.2.1 LB培养基 | 第36-37页 |
| 3.2.2 产氢培养基 | 第37页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE的配方 | 第37页 |
| 3.2.4 PBS缓冲液配方 | 第37-38页 |
| 3.3 方法 | 第38-43页 |
| 3.3.1 产氢质粒pETD-SL的构建 | 第38-42页 |
| 3.3.2 重组大肠杆菌BH20的筛选 | 第42-43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-49页 |
| 3.4.1 基因hupL和hupS的克隆 | 第43-44页 |
| 3.4.2 基因hupL和hupS的双酶切反应 | 第44页 |
| 3.4.3 pETD-SL载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.4.4 pETD-SL测序结果 | 第45-46页 |
| 3.4.5 镍铁氢酶蛋白的表达 | 第46页 |
| 3.4.6 重组大肠杆菌产氢结果 | 第46-47页 |
| 3.4.7 小结与讨论 | 第47-49页 |
| 第4章 大肠杆菌BH20产氢研究 | 第49-57页 |
| 4.1 试剂和仪器 | 第49页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第49页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第49页 |
| 4.2 产氢培养基配方 | 第49页 |
| 4.3 方法 | 第49-52页 |
| 4.3.1 葡萄糖浓度的测定 | 第49-50页 |
| 4.3.2 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第50-51页 |
| 4.3.3 气相色谱法测氢气含量 | 第51页 |
| 4.3.4 大肠杆菌BH20产氢实验 | 第51-52页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第52-57页 |
| 4.4.1 温度对产氢的影响 | 第52-53页 |
| 4.4.2 pH值对产氢的影响 | 第53-54页 |
| 4.4.3 葡萄糖浓度对产氢的影响 | 第54-55页 |
| 4.4.4 最适条件下产氢结果 | 第55-56页 |
| 4.4.5 小结与讨论 | 第56-57页 |
| 结论与展望 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 攻读学位期间取得学术成果 | 第67-68页 |
| 附录 菌种鉴定报告 | 第68-70页 |
