| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 无脊椎动物先天免疫研究进展 | 第13-27页 |
| 1. 无脊椎动物的Toll信号通路 | 第13-16页 |
| 2. 无脊椎动物的IMD信号通路 | 第16-18页 |
| 3. 无脊椎动物的Jak/Stat信号通路 | 第18-21页 |
| 4.抑制蛋白arrestins对调控信号通路机制的研究 | 第21-23页 |
| 5. 无脊椎动物PRRs中的FREPs | 第23-24页 |
| 6. 本论文研究的目的,结果及意义 | 第24-27页 |
| 第二章 在对虾中,β-arrestin通过调控Dorsal的转位和转录活性来负性调控Toll信号通路 | 第27-57页 |
| 一、前言 | 第27-29页 |
| 二、材料和方法 | 第29-34页 |
| 1. 试剂和仪器 | 第29页 |
| 2. 细菌刺激和样品的收集 | 第29-30页 |
| 3. cDNA的克隆和序列分析 | 第30页 |
| 4. 组织的提取和半定量RT-PCR水平和western blot水平的表达模式 | 第30页 |
| 5. 重组蛋白的表达和抗体的制备 | 第30页 |
| 6. 荧光实时定量PCR反转得到的cDNA | 第30-31页 |
| 7. RNAi实验 | 第31页 |
| 8. 核质提取的实验 | 第31-32页 |
| 9. 细菌清除和存活率的实验 | 第32页 |
| 10. Pull-down实验 | 第32页 |
| 11. 免疫细胞化学实验 | 第32页 |
| 12. 免疫共沉淀 | 第32-33页 |
| 13. PD98059抑制剂实验 | 第33-34页 |
| 三、结果 | 第34-54页 |
| 1. 在S. aureus刺激后Toll信号通路被激活并在对虾抗细菌免疫中起着关键的作用 | 第34-38页 |
| 2. βArr1,βarr2和ERK参与了Toll信号通路的调控 | 第38-41页 |
| 3. βArrs和Cactus作用形成βarr-Cactus-Dorsal三聚体 | 第41-43页 |
| 4. βArrs的N-terminal结构域与Cactus的PEST结构域具有相互作用 | 第43页 |
| 5. 用GST-binding柱料和His-binding柱料来做pull down实验 | 第43-46页 |
| 6. Cactus的ANK结构域和Dorsal的RHD结构域作用及βarrs,Cactus和Dorsal形成复合物 | 第46-48页 |
| 7. βArrs和非磷酸化的ERK相互作用抑制ERK的磷酸化 | 第48-50页 |
| 8. βArrs的C-terminus与ERK作用 | 第50-51页 |
| 9. ERK影响细胞核中Dorsal的磷酸化水平 | 第51-54页 |
| 四、讨论 | 第54-57页 |
| 第三章 β-Arrestin 1与TC45作用使Stat去磷酸化进而抑制抗菌肽的表达 | 第57-79页 |
| 一、前言 | 第57-58页 |
| 二、材料和方法 | 第58-63页 |
| 1. 试剂和仪器 | 第58页 |
| 2. 组织分布 | 第58页 |
| 3. 分子克隆和序列分析 | 第58-59页 |
| 4. 重组表达和抗体制备 | 第59页 |
| 5. RNAi实验 | 第59页 |
| 6. 细菌的清除和死亡率实验 | 第59页 |
| 7. Western blotting分析 | 第59-60页 |
| 8. 免疫细胞化学实验 | 第60页 |
| 9. 免疫共沉淀 | 第60页 |
| 10. 抑制剂实验 | 第60-61页 |
| 11. Pull-down实验 | 第61页 |
| 12. 干扰掉Stat,βarr1和TC45再用形V.anguillarum刺激检测AMPs的变化 | 第61页 |
| 13. βArr1和TC45过表达 | 第61-63页 |
| 三、结果 | 第63-77页 |
| 1. 对虾中βarrs,TC45和Stat的组织分布 | 第63-64页 |
| 2. Stat参与了对虾抗细菌免疫 | 第64-66页 |
| 3. 干扰掉βarr1和TC45后Stat的磷酸化水平升高 | 第66-68页 |
| 4. βArr1和TC45通过使活化的Stat的去磷酸化负性调控了Stat的抗细菌免疫 | 第68-70页 |
| 5. βArr1,TC45和Stat三者之间能发生相互作用 | 第70-72页 |
| 6. βArr1的C-terminal结构域和Stat的Link结构域作用 | 第72-74页 |
| 7. TC45分别与Stat~(599-800),βarrl的C-terminal结构域作用 | 第74-75页 |
| 8. βArr1和TC45影响Stat所调控的AMPs的表达 | 第75-77页 |
| 四、讨论 | 第77-79页 |
| 第四章 一种纤维蛋白原相关蛋白参与对虾的抗细菌免疫 | 第79-96页 |
| 一、引言 | 第79-80页 |
| 二、材料和方法 | 第80-84页 |
| 1. 试剂和仪器 | 第80页 |
| 2. 病原免疫刺激和组织样提取 | 第80页 |
| 3. RNA的提取和cDNA的合成 | 第80页 |
| 4. MjFREP2全长的克隆 | 第80页 |
| 5. 序列BLAST分析和相似性比较 | 第80-81页 |
| 6. MjFREP2蛋白的表达和纯化及抗体的制备 | 第81页 |
| 7. 半定量PCR和荧光定量PCR | 第81页 |
| 8. Western blot分析 | 第81页 |
| 9. 细菌凝集实验 | 第81页 |
| 10. 细菌结合实验 | 第81-82页 |
| 11. 酶联免疫反应实验(ELISA) | 第82页 |
| 12. 免疫细胞化学实验 | 第82-83页 |
| 13. 细菌清除实验 | 第83页 |
| 14. 荧光标记细菌和吞噬实验 | 第83页 |
| 15. RNAi实验 | 第83页 |
| 16. 对虾死亡率实验 | 第83-84页 |
| 三、结果 | 第84-94页 |
| 1. MjFREP2基因克隆和序列分析 | 第84-87页 |
| 2. MjFREP2广泛分布各个组织中及受到细菌刺激之后上调表达 | 第87-89页 |
| 3. MjFREP2在钙离子存在下能够凝集细菌 | 第89页 |
| 4. MjFREP2通过结合多糖结合到细菌的表面 | 第89-90页 |
| 5. MjFREP2被血细胞分泌出去并结合到血淋巴中的细菌上 | 第90-91页 |
| 6. 在对虾体内,MjFREP2促进了细菌的清除 | 第91-93页 |
| 7. MjFREP2促进了对虾血细胞的吞噬 | 第93-94页 |
| 四、讨论 | 第94-96页 |
| 论文创新点总结 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 在读期间发表的文章 | 第110-112页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第112页 |
