| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-30页 |
| 第一节 几丁质酶及甲壳动物蜕壳相关研究概况 | 第14-23页 |
| 1 几丁质 | 第14-16页 |
| ·几丁质聚合物的结构特征 | 第14-15页 |
| ·α型几丁质 | 第14页 |
| ·β型几丁质 | 第14-15页 |
| ·γ型几丁质 | 第15页 |
| ·几丁质在节肢动物中的分布特征 | 第15-16页 |
| ·几丁质的降解 | 第16页 |
| 2 几丁质酶及其分类 | 第16-18页 |
| ·几丁质酶 | 第16-17页 |
| ·几丁质酶的分类 | 第17-18页 |
| ·基于几丁质酶氨基酸序列同源性的分类 | 第17页 |
| ·基于水解后初级产物类型的分类 | 第17-18页 |
| ·基于几丁质酶活性的分类 | 第18页 |
| 3 甲壳动物蜕壳及其调控的研究 | 第18-23页 |
| ·甲壳动物的蜕壳类型 | 第18-19页 |
| ·变态蜕壳 | 第19页 |
| ·生长蜕壳 | 第19页 |
| ·再生蜕壳 | 第19页 |
| ·生殖蜕壳 | 第19页 |
| ·甲壳动物的蜕壳周期 | 第19-20页 |
| ·影响甲壳动物蜕壳的环境因素 | 第20-21页 |
| ·温度对甲壳动物蜕壳的影响 | 第20-21页 |
| ·盐度对甲壳动物蜕壳的影响 | 第21页 |
| ·重金属离子对甲壳动物蜕壳的影响 | 第21页 |
| ·甲壳动物蜕壳的调控 | 第21-23页 |
| 第二节 几丁质酶基因的研究进展 | 第23-28页 |
| 1 几丁质酶基因研究概况 | 第23-24页 |
| ·昆虫几丁质酶基因 | 第23页 |
| ·甲壳动物几丁质酶基因 | 第23-24页 |
| 2 几丁质酶基因编码的氨基酸序列结构特征 | 第24-25页 |
| ·催化结构域 | 第24-25页 |
| ·S/T富集的连接区 | 第25页 |
| ·几丁质结合结构域 | 第25页 |
| 3 几丁质酶基因表达的调控 | 第25-27页 |
| ·几丁质酶基因的组织分布和表达模式 | 第25-26页 |
| ·几丁质酶基因的表达量和酶活性的周期性变化 | 第26页 |
| ·几丁质酶基因的表达受到激素的调控 | 第26-27页 |
| 4 几丁质酶的功能研究 | 第27-28页 |
| ·在蜕壳反应中的作用 | 第27页 |
| ·在免疫学中的作用 | 第27-28页 |
| ·在消化反应中的作用 | 第28页 |
| 第三节 本研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 第二章 青虾六个几丁质酶基因的克隆及序列分析 | 第30-54页 |
| 1 实验材料 | 第30-31页 |
| ·实验虾 | 第30-31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·仪器 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-40页 |
| ·青虾总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·实验用品的预处理 | 第31页 |
| ·总RNA的提取 | 第31页 |
| ·DNase消化 | 第31-32页 |
| ·总RNA的浓度测定和质量检测 | 第32页 |
| ·cDNA合成 | 第32页 |
| ·青虾几丁质酶基因中间片段的获得及验证 | 第32-35页 |
| ·中间片段的获取 | 第32-33页 |
| ·中间片段的验证 | 第33-35页 |
| ·RACE快速扩增 | 第35-37页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因3’端扩增 | 第35页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因的5’端扩增 | 第35-37页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第37-38页 |
| ·PCR产物的回收 | 第37页 |
| ·连接 | 第37页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第37页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第37-38页 |
| ·质粒提取与测序 | 第38页 |
| ·序列拼接 | 第38页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因全长cDNA完整性验证 | 第38-39页 |
| ·生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-52页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因中间片段序列 | 第40-41页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因3’端的分离 | 第41-42页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因5’端的分离 | 第42-43页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因全长cDNA序列结构特征 | 第43-44页 |
| ·基因命名和系统进化分析 | 第44-47页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因编码的氨基酸序列比对 | 第47-50页 |
| ·三级结构预测 | 第50页 |
| ·青虾六个几丁质酶氨基酸序列一致性比较 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 青虾六个几丁质酶基因的时空表达特征以及温度变化对表达的影响 | 第54-68页 |
| 1 实验材料 | 第55页 |
| ·实验虾 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·仪器 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-59页 |
| ·青虾胚后发育样品的采集 | 第55-56页 |
| ·青虾组织表达样品的采集 | 第56页 |
| ·青虾蜕壳周期样品的采集 | 第56页 |
| ·不同温度样品的采集 | 第56-57页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因时空表达的实时荧光定量PCR分析 | 第57-59页 |
| ·引物设计及检验 | 第57-58页 |
| ·总RNA的提取 | 第58页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第58-59页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第59页 |
| ·实时荧光定量PCR分析 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-64页 |
| ·青虾各样本总RNA的检测 | 第59页 |
| ·荧光定量引物的验证 | 第59-60页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因在成体不同组织中的表达 | 第60-61页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因在胚后发育期的表达 | 第61-62页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因在蜕壳周期的表达 | 第62-63页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因在不同温度下的表达 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-68页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因在成体不同组织的表达差异 | 第64-65页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因在不同发育时期的表达差异 | 第65-66页 |
| ·青虾六个几丁质酶基因在蜕壳周期和温度下的表达规律 | 第66-68页 |
| 全文结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-82页 |
| 附录 | 第82-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 已发表或已接收的论文 | 第92页 |
