| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 缩写词表 | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-20页 |
| 1 概述 | 第10-19页 |
| ·病原特性 | 第10-12页 |
| ·理化特性 | 第10-11页 |
| ·病毒增殖 | 第11-12页 |
| ·病毒的变异 | 第12页 |
| ·流行病学特点 | 第12-13页 |
| ·诊断方法 | 第13-17页 |
| ·临床症状及病理特征 | 第13页 |
| ·病毒的分离 | 第13-14页 |
| ·电镜观察 | 第14页 |
| ·中和试验 | 第14页 |
| ·血凝试验 | 第14-15页 |
| ·琼脂免疫扩散试验 | 第15页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第15页 |
| ·免疫胶体金诊断技术 | 第15-16页 |
| ·其他免疫学方法 | 第16页 |
| ·分子生物学诊断技术 | 第16-17页 |
| ·预防 | 第17页 |
| ·治疗 | 第17-18页 |
| ·鸭肝炎病毒的纯化 | 第18页 |
| ·单克隆抗体技术在DHV检测方面优势及应用 | 第18-19页 |
| 2 目的意义 | 第19页 |
| 3 研究设想 | 第19-20页 |
| 第一章 DHV抗原的制备 | 第20-29页 |
| 1 材料与方法 | 第20-22页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·病毒 | 第20页 |
| ·抗血清 | 第20页 |
| ·实验鸭胚和实验鸭 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-22页 |
| ·鸭胚半数致死量（DELD50）的测定 | 第20页 |
| ·交叉中和试验 | 第20-21页 |
| ·病毒液制备 | 第21页 |
| ·病毒纯化 | 第21-22页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第22页 |
| ·纯化病毒的检测 | 第22页 |
| 2 结果 | 第22-27页 |
| ·病毒对鸭胚的毒力 | 第22-23页 |
| ·病毒对鸭胚原代肝细胞（DELC）的致细胞病变特性 | 第23-24页 |
| ·病毒液病毒含量测定 | 第24页 |
| ·病毒液特异性鉴定 | 第24-25页 |
| ·病毒纯化 | 第25-26页 |
| ·纯化病毒的检测 | 第26-27页 |
| 3 讨论 | 第27-29页 |
| ·鸭肝炎病毒的培养 | 第27页 |
| ·中和试验 | 第27页 |
| ·鸭肝炎病毒的纯化 | 第27-29页 |
| 第二章 DHV单克隆抗体的制备 | 第29-49页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·病毒 | 第29页 |
| ·实验动物 | 第29页 |
| ·细胞 | 第29页 |
| ·阳性血清 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-36页 |
| ·间接ELISA方法 | 第30页 |
| ·BALB/c小鼠的免疫 | 第30-31页 |
| ·细胞融合 | 第31-32页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第31页 |
| ·SP2/0 骨髓瘤细胞复苏与扩大培养 | 第31页 |
| ·免疫脾细胞制备 | 第31-32页 |
| ·融合 | 第32页 |
| ·阳性孔的筛选 | 第32页 |
| ·杂交瘤阳性细胞的克隆化 | 第32-33页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第33页 |
| ·腹水抗体的制备及纯化 | 第33-34页 |
| ·腹水抗体的制备 | 第33页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体的纯化鉴定 | 第34页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第34-36页 |
| ·染色体检查 | 第34-35页 |
| ·单克隆抗体效价的测定 | 第35页 |
| ·MAb的相对亲和力的测定 | 第35页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第35页 |
| ·单克隆抗体亚型的鉴定 | 第35页 |
| ·稳定性观察 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-44页 |
| ·间接ELISA方法最佳条件的确定 | 第36-38页 |
| ·最适抗原包被浓度和酶标二抗工作浓度的确定 | 第36页 |
| ·阳性对照血清最佳稀释度确定 | 第36-37页 |
| ·阴阳性临界值确定 | 第37-38页 |
| ·免疫小鼠抗体效价 | 第38-39页 |
| ·细胞融合及亚克隆 | 第39-40页 |
| ·腹水单抗制备及抗体纯化 | 第40-41页 |
| ·杂交瘤细胞株染色体的鉴定 | 第41页 |
| ·杂交瘤细胞细胞培养上清液效价及其腹水效价测定 | 第41-42页 |
| ·单克隆抗体亲和力测定 | 第42-43页 |
| ·单抗与二型DHV及其他鸭病原反应鉴定 | 第43页 |
| ·单抗亚类的鉴定 | 第43页 |
| ·杂交瘤细胞株稳定性鉴定 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-49页 |
| ·抗原的要求 | 第45页 |
| ·小鼠免疫 | 第45-46页 |
| ·建立筛选方法 | 第46-47页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第47-49页 |
| 第三章 DHV单克隆抗体的初步应用--改良双夹心ELISA （AC-ELISA）方法的建立 | 第49-60页 |
| 1 材料 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·病毒 | 第49页 |
| ·血清 | 第49页 |
| ·动物 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49-50页 |
| 2 方法 | 第50-52页 |
| ·多克隆抗体的制备与纯化 | 第50-51页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第50页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第50页 |
| ·纯化的多克隆抗体的鉴定 | 第50-51页 |
| ·改良双夹心ELISA方法的建立 | 第51页 |
| ·鼠单克隆抗体和兔多克隆抗体最佳工作浓度的确定 | 第51页 |
| ·封闭液和封闭时间的选择 | 第51页 |
| ·反应程式的确定 | 第51页 |
| ·临界点的确定 | 第51页 |
| ·特异性试验 | 第51-52页 |
| ·检测的灵敏度的测定 | 第52页 |
| ·重复性试验 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-58页 |
| ·兔高免血清效价 | 第52-53页 |
| ·纯化兔抗体的鉴定 | 第53-54页 |
| ·活性测定 | 第53页 |
| ·纯度鉴定 | 第53页 |
| ·蛋白含量测定 | 第53-54页 |
| ·改良双夹心ELISA方法最佳条件的确定 | 第54-56页 |
| ·鼠单抗与兔多抗最佳工作浓度的确定 | 第54页 |
| ·封闭液与封闭时间的确定 | 第54-55页 |
| ·反应程式的确定 | 第55页 |
| ·临界值的确定 | 第55-56页 |
| ·改良双夹心ELISA操作术式 | 第56页 |
| ·ELISA检测的特异性 | 第56-57页 |
| ·特异性阻断试验鉴定 | 第56-57页 |
| ·AC-ELISA方法的反应性 | 第57页 |
| ·ELISA检测的灵敏度 | 第57-58页 |
| ·ELISA检测的可重复性 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 结论及下步工作设想 | 第60-61页 |
| 1 结论 | 第60页 |
| 2 下步工作设想 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录一 溶液配制 | 第67-71页 |
| 附录二 仪器设备 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |