| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-19页 |
| 1 植物基因工程的进展 | 第8-9页 |
| ·植物基因工程的现状 | 第8页 |
| ·植物基因工程的前景 | 第8-9页 |
| 2 植物遗传转化方法 | 第9-14页 |
| ·农杆菌介导法 | 第9-13页 |
| ·根癌农杆菌介导法 | 第9-10页 |
| ·发根农杆菌介导法 | 第10-11页 |
| ·农杆菌转化的影响因素 | 第11-13页 |
| ·农杆菌介导法的优缺点 | 第13页 |
| ·植物病毒载体介导法 | 第13页 |
| ·DNA直接导入法 | 第13-14页 |
| ·基因枪法 | 第13-14页 |
| ·脂质体法 | 第14页 |
| ·电穿孔法 | 第14页 |
| ·花粉管通道法 | 第14页 |
| 3 转基因植物筛选与检测 | 第14-16页 |
| ·转基因植物的筛选 | 第15页 |
| ·转基因植物的检测 | 第15-16页 |
| ·PCR检测 | 第15页 |
| ·RT-PCR检测 | 第15-16页 |
| ·组织化学染色检测 | 第16页 |
| 4 转基因植物的安全性与展望 | 第16-17页 |
| ·转基因植物的安全性 | 第16-17页 |
| ·转基因植物的生态安全性 | 第16-17页 |
| ·转基因植物的食品安全性 | 第17页 |
| ·转基因植物的展望 | 第17页 |
| 5 ORF25基因的研究进展 | 第17-18页 |
| 6 研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 烟草orf25基因植物表达载体构建 | 第19-29页 |
| 1 试验仪器与材料 | 第19页 |
| ·实验菌株及载体 | 第19页 |
| ·实验试剂及药品 | 第19页 |
| ·实验仪器及设备 | 第19页 |
| ·培养基和试剂的配制 | 第19页 |
| 2 实验方法 | 第19-26页 |
| ·p BI121-Ca MV35S-Orf25表达载体的构建 | 第19-23页 |
| ·质粒p UC57-Orf25的PCR检测 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第20页 |
| ·质粒提取 | 第20-21页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第21页 |
| ·质粒的酶切 | 第21页 |
| ·目的片段的回收 | 第21-22页 |
| ·目的片段与载体片段的连接 | 第22页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α 和鉴定 | 第22页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第22-23页 |
| ·农杆菌的转化 | 第23页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第23页 |
| ·pBI121-Pchs A表达载体的构建 | 第23-25页 |
| ·质粒p BI121-Pchs A的PCR检测 | 第23-24页 |
| ·质粒的酶切以及目的片段的回收 | 第24页 |
| ·目的片段的连接以及转化大肠杆菌 | 第24-25页 |
| ·农杆菌转化和阳性克隆鉴定 | 第25页 |
| ·pBI121-Pchs A-Orf25表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·质粒的酶切和目的片段的回收 | 第25页 |
| ·目的片段的连接和转化大肠杆菌 | 第25-26页 |
| ·农杆菌转化和阳性克隆鉴定 | 第26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-29页 |
| ·质粒p UC57-Orf25的酶切及PCR检测结果 | 第26页 |
| ·p BI121-Ca MV35S-Orf25阳性克隆的酶切及PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·质粒p UC57-Pchs A的PCR检测结果 | 第27页 |
| ·PBI121-Pchs A阳性克隆的酶切及PCR鉴定 | 第27-28页 |
| ·p BI121-Pchs A-Orf25阳性克隆的酶切及PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 第三章 根癌农杆菌介导烟草遗传转化及转化植株的检测 | 第29-41页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第29-30页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·实验试剂 | 第29页 |
| ·激素和抗生素的配制 | 第29页 |
| ·培养基的配制 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-34页 |
| ·根癌农杆菌介导烟草遗传转化体系的构建 | 第30-31页 |
| ·根癌农杆菌介导烟草遗传转化影响因素的筛选和优化 | 第31-32页 |
| ·不同激素浓度对烟草不定芽分化及生根的影响 | 第31页 |
| ·外植体预培养时间对遗传转化的影响 | 第31-32页 |
| ·卡那霉素浓度的筛选 | 第32页 |
| ·菌液浓度及侵染时间对遗传转化的影响 | 第32页 |
| ·共培养时间对遗传转化的影响 | 第32页 |
| ·氨苄青霉素浓度的筛选 | 第32页 |
| ·转化植株生根培养和移栽 | 第32页 |
| ·转基因烟草DNA的PCR检测 | 第32-34页 |
| ·烟草叶片总DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-41页 |
| ·不同激素浓度对烟草不定芽分化及生根的影响 | 第34-35页 |
| ·外植体预培养时间对遗传转化的影响 | 第35页 |
| ·卡那霉素浓度的筛选 | 第35-36页 |
| ·菌液浓度及侵染时间对遗传转化的影响 | 第36-37页 |
| ·共培养时间对遗传转化的影响 | 第37-38页 |
| ·氨苄青霉素浓度的筛选 | 第38页 |
| ·转基因烟草植株的获得 | 第38-39页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第39-41页 |
| 第四章 讨论 | 第41-44页 |
| 1 植物表达载体的构建 | 第41页 |
| 2 根癌农杆菌介导烟草遗传转化 | 第41-44页 |
| 第五章 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
