| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 1 绪论 | 第16-37页 |
| ·漆酶的研究概况 | 第16-30页 |
| ·漆酶的生物学背景 | 第16-19页 |
| ·细菌漆酶的生物学特性 | 第19-22页 |
| ·细菌漆酶的高级结构与催化功能 | 第22-25页 |
| ·细菌漆酶的应用 | 第25-26页 |
| ·具漆酶活性CotA芽孢蛋白研究概况 | 第26-30页 |
| ·酶的分子定向进化研究概况 | 第30-35页 |
| ·酶的分子定向进化理论依据 | 第30-31页 |
| ·酶的分子定向进化方法 | 第31-32页 |
| ·酶的分子定向进化的筛选 | 第32-34页 |
| ·定向进化在酶工程中的主要应用 | 第34-35页 |
| ·课题背景 | 第35-37页 |
| ·课题来源 | 第35页 |
| ·课题研究意义 | 第35-36页 |
| ·课题研究内容 | 第36页 |
| ·课题创新点 | 第36-37页 |
| 2 芽孢杆菌属漆酶基因的克隆表达与纯化 | 第37-64页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·菌种与载体 | 第37页 |
| ·实验试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·实验仪器 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-47页 |
| ·芽孢杆菌漆酶基因的克隆 | 第39-41页 |
| ·重组克隆质粒pMD18-T/lac的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组表达质粒pETDuet-1/lac-LS03的构建及鉴定 | 第42-44页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌漆酶的诱导表达及其酶活测定 | 第44-45页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌漆酶的纯化 | 第45-46页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌漆酶的酶学性质 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-60页 |
| ·芽孢杆菌属漆酶基因的克隆 | 第47-48页 |
| ·重组阳性克隆质粒pMD18-T/lac的构建与鉴定 | 第48页 |
| ·枯草芽孢杆菌漆酶基因的测序及生物信息学分析 | 第48-54页 |
| ·重组表达质粒pETDuet-1/lac-LS03的构建与鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌漆酶的诱导表达 | 第55页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌漆酶的纯化 | 第55-57页 |
| ·pH对重组CotA漆酶活性及酶稳定性的影响 | 第57页 |
| ·温度对重组CotA漆酶活性及酶稳定性的影响 | 第57-58页 |
| ·金属离子对重组CotA漆酶活性的影响 | 第58页 |
| ·有机溶剂对重组CotA漆酶活性的影响 | 第58-59页 |
| ·抑制剂对重组CotA漆酶活性的影响 | 第59-60页 |
| ·酶促反应动力学研究 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| ·本章小结 | 第62-64页 |
| 3 芽孢杆菌属漆酶的定向进化 | 第64-80页 |
| ·实验材料 | 第64-65页 |
| ·菌种与载体 | 第64页 |
| ·实验试剂 | 第64-65页 |
| ·实验仪器 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-68页 |
| ·质粒抽提 | 第65页 |
| ·易错PCR扩增芽孢杆菌属漆酶基因 | 第65-66页 |
| ·DNA Family Shuffling随机突变芽孢杆菌属漆酶基因 | 第66-67页 |
| ·含cotA突变基因的表达文库的构建与筛选 | 第67-68页 |
| ·突变漆酶的序列分析与三维结构同源建模 | 第68页 |
| ·突变漆酶的诱导表达与分离纯化 | 第68页 |
| ·突变漆酶的酶学性质 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-77页 |
| ·芽孢杆菌属漆酶的定向进化实验设计 | 第68-69页 |
| ·易错PCR构建芽孢杆菌属CotA漆酶基因随机突变库 | 第69-70页 |
| ·DNA Family Shuffling构建芽孢杆菌属漆酶基因随机突变库 | 第70-71页 |
| ·含cotA突变基因的表达文库的构建与筛选 | 第71-73页 |
| ·突变漆酶的序列分析与三维结构同源建模 | 第73-74页 |
| ·突变漆酶的酶学性质 | 第74-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| ·本章小结 | 第79-80页 |
| 4 枯草芽孢杆菌漆酶蛋白结构域的定向进化 | 第80-92页 |
| ·实验材料 | 第80-81页 |
| ·菌种与载体 | 第80页 |
| ·实验试剂 | 第80页 |
| ·实验仪器 | 第80-81页 |
| ·实验方法 | 第81-83页 |
| ·枯草芽孢杆菌漆酶结构域基因的获得 | 第81页 |
| ·枯草芽孢杆菌漆酶第一结构域突变库的构建与筛选 | 第81-82页 |
| ·枯草芽孢杆菌漆酶蛋白第二结构域突变库的构建 | 第82页 |
| ·枯草芽孢杆菌漆酶蛋白第三结构域突变库的构建 | 第82页 |
| ·枯草芽孢杆菌漆酶蛋白结构域表达文库的构建 | 第82-83页 |
| ·枯草芽孢杆菌漆酶蛋白结构域表达文库的筛选 | 第83页 |
| ·结构域突变漆酶的序列分析与三维结构同源建模 | 第83页 |
| ·结构域突变漆酶的诱导表达与分离纯化 | 第83页 |
| ·结构域突变漆酶的酶学性质 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-90页 |
| ·枯草芽孢杆菌漆酶结构域定向进化实验设计 | 第83页 |
| ·枯草芽孢杆菌漆酶结构域的获得 | 第83-84页 |
| ·易错PCR扩增枯草芽孢杆菌漆酶结构域基因 | 第84-85页 |
| ·重叠延伸PCR获取枯草芽孢杆菌cotA全长基因序列 | 第85页 |
| ·枯草芽孢杆菌漆酶蛋白结构域随机突变库的构建与筛选 | 第85-86页 |
| ·结构域突变漆酶的序列分析与三维结构同源建模 | 第86-87页 |
| ·枯草芽孢杆菌结构域突变漆酶的酶学性质 | 第87-90页 |
| ·讨论 | 第90-91页 |
| ·本章小结 | 第91-92页 |
| 5 突变漆酶在染料脱色中的应用 | 第92-108页 |
| ·实验材料 | 第92-93页 |
| ·菌种与载体 | 第92页 |
| ·实验试剂 | 第92-93页 |
| ·实验仪器 | 第93页 |
| ·实验方法 | 第93页 |
| ·野生型和突变漆酶对合成染料的脱色 | 第93页 |
| ·漆酶-介体系统对合成染料的脱色 | 第93页 |
| ·野生型和突变漆酶对染料废水的脱色 | 第93页 |
| ·结果与分析 | 第93-105页 |
| ·野生型漆酶对染料的脱色 | 第93-96页 |
| ·CotA-46突变漆酶对染料的脱色 | 第96-99页 |
| ·CotA-183突变漆酶对染料的脱色 | 第99-102页 |
| ·LS03-CotA-76突变漆酶对染料的脱色 | 第102-105页 |
| ·讨论 | 第105-106页 |
| ·本章小结 | 第106-108页 |
| 结论 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-124页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
