| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 专业词汇中英文对照表 | 第9-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-31页 |
| ·Cathepsin D与疾病 | 第17-19页 |
| ·CD与阿尔茨海默病相关 | 第17页 |
| ·CD参与动脉粥样硬化症的发生 | 第17页 |
| ·CD参与肿瘤的发生发展 | 第17-19页 |
| ·CD作为肿瘤标志物 | 第17-18页 |
| ·CD的有丝分裂原作用 | 第18页 |
| ·CD在血管生成中的作用 | 第18页 |
| ·CD促进肿瘤细胞的侵袭和转移 | 第18-19页 |
| ·CD的生物学功能 | 第19-23页 |
| ·CD的翻译与转运 | 第19页 |
| ·CD的分布 | 第19-20页 |
| ·CD剪切、降解多种蛋白质和多肽 | 第20-21页 |
| ·CD参与细胞凋亡 | 第21-23页 |
| ·CD促凋亡的作用 | 第21-22页 |
| ·CD抗凋亡的作用 | 第22-23页 |
| ·CD参与自噬过程 | 第23页 |
| ·CD参与细胞老化 | 第23页 |
| ·水解酶催化特征是CD研究的核心内容之一 | 第23页 |
| ·蛋白酶的底物与剪切位点的研究策略 | 第23-28页 |
| ·蛋白酶的底物鉴定方法 | 第23-25页 |
| ·相对和绝对定量的同重标记法 | 第24页 |
| ·双向凝胶电泳和双向差异凝胶电泳法 | 第24页 |
| ·质谱导向的数据采集法 | 第24-25页 |
| ·同位素编码亲和标签法 | 第25页 |
| ·蛋白酶的剪切位点鉴定方法 | 第25-28页 |
| ·基于赖氨酸胍基化的蛋白质N-末端的生物素化法 | 第25-26页 |
| ·底物的末端胺同位素标记法 | 第26-27页 |
| ·iTRAQ分析N-末端法 | 第27页 |
| ·联合分离对角线层析法 | 第27-28页 |
| ·CD底物和剪切位点的研究现状 | 第28-31页 |
| 第二章 Cathepsin D knockdown降低肿瘤细胞的迁移能力 | 第31-49页 |
| ·前言 | 第31-32页 |
| ·材料与方法 | 第32-42页 |
| ·实验结果 | 第42-48页 |
| ·人CD基因siRNA质粒的构建 | 第42页 |
| ·CD基因knockdown稳定细胞株的筛选 | 第42-43页 |
| ·A549 CD-knockdown细胞分泌蛋白的双向电泳分析 | 第43-45页 |
| ·Western blot检测A549 CD-knockdown细胞分泌蛋白中的CD | 第45页 |
| ·A549 CD-knockdown细胞运动和侵袭能力的变化 | 第45-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第三章 Cathepsin D在BSA和OVA上剪切位点及特征性的分析 | 第49-73页 |
| ·前言 | 第49-51页 |
| ·材料与方法 | 第51-56页 |
| ·实验结果 | 第56-72页 |
| ·LC-MS/MS检测蛋白酶剪切位点的可行性和准确性 | 第56-58页 |
| ·LC-MS/MS检测胰蛋白酶的剪切位点 | 第56页 |
| ·Sequence logo绘制胰蛋白酶剪切位点特征性 | 第56-58页 |
| ·多种底物与CD的酶促反应 | 第58-59页 |
| ·CD在BSA上剪切位点及特征性分析 | 第59-64页 |
| ·CD对BSA的水解呈现时间依赖性 | 第59-60页 |
| ·CD在BSA上的剪切位点特征性分析 | 第60-61页 |
| ·CD剪切位点的疏水性分析 | 第61-62页 |
| ·比邻氨基酸的疏水值(the hydrophobic scores of neighbors)的分析 | 第62-63页 |
| ·剪切组C-HSN和未检测组U-HSN的对比分析 | 第63-64页 |
| ·CD在OVA上剪切位点及特征性分析 | 第64-72页 |
| ·CD不剪切天然OVA | 第64-66页 |
| ·延长酶促反应时间不能促进CD对天然OVA的剪切 | 第64页 |
| ·反应条件变化均不能促进CD对天然OVA的剪切 | 第64-66页 |
| ·CD剪切变性的OVA | 第66-67页 |
| ·变性OVA的时间依赖性水解 | 第67页 |
| ·CD在变性OVA上剪切位点的特征性分析 | 第67-69页 |
| ·CD在变性OVA上剪切位点的疏水性分析 | 第69页 |
| ·比邻氨基酸的疏水值(the hydrophobic scores of neighbors)的分析 | 第69-70页 |
| ·剪切组C-HSN和未检测组U-HSN的对比分析 | 第70-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第四章 Cathepsin D在多个蛋白质上的剪切位点及其特征性分析 | 第73-89页 |
| ·前言 | 第73-75页 |
| ·材料与方法 | 第75-77页 |
| ·实验结果 | 第77-87页 |
| ·CD对多种蛋白质的剪切情况 | 第77-78页 |
| ·CD在多种蛋白分子中剪切位点的检测 | 第78页 |
| ·CD在多种蛋白底物上剪切位点的特征性分析 | 第78-80页 |
| ·CD剪切位点数据库的构建与分析 | 第80页 |
| ·基于CCPD的CD剪切位点疏水性分析 | 第80-84页 |
| ·CD剪切位点附近12个位置上氨基酸的疏水性的分析 | 第80-81页 |
| ·对P1和P1’位置上氨基酸的疏水性的分析 | 第81-82页 |
| ·HSN的分析 | 第82页 |
| ·CCPD中C-HSN与U-HSN的对比分析 | 第82-84页 |
| ·CD在同源蛋白质上的剪切位点具有保守性 | 第84-87页 |
| ·小结 | 第87-89页 |
| 第五章 分析cathepsin D底物识别特征性 | 第89-101页 |
| ·前言 | 第89-91页 |
| ·材料与方法 | 第91-94页 |
| ·实验结果 | 第94-99页 |
| ·CD消化前后的胞浆蛋白质的双向凝胶电泳分离 | 第94页 |
| ·蛋白质组图谱的分析 | 第94页 |
| ·不被CD剪切的蛋白点的质谱鉴定 | 第94-96页 |
| ·分析一些蛋白质不被CD剪切的原因 | 第96-99页 |
| ·小结 | 第99-101页 |
| 第六章 讨论 | 第101-107页 |
| ·研究CD在天然蛋白底物中剪切位点的必要性 | 第101-102页 |
| ·液相色谱-串联质谱(LC-MSMS)与双向电泳(2DE) | 第102页 |
| ·CD在蛋白质中的剪切位点特征性 | 第102-103页 |
| ·Hydrophobic scores of neighbors(HSN)的意义 | 第103页 |
| ·CD底物选择特征性——蛋白质空间结构的影响 | 第103-104页 |
| ·HSN与蛋白质空间结构在决定蛋白质对CD敏感性时的关系 | 第104页 |
| ·其他天冬氨酸蛋白酶的剪切位点的HSN分布 | 第104-105页 |
| ·CD在肿瘤发生发展中的作用和机制 | 第105-107页 |
| 基本结论 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-121页 |
| 附表 Cathepsin D剪切肽段库(CCPD) | 第121-137页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第137页 |
