| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪言 | 第10-22页 |
| 前言 | 第10页 |
| ·自然界中利用木糖的微生物及木糖代谢途经 | 第10-13页 |
| ·利用木糖的微生物 | 第10-11页 |
| ·自然界中木糖代谢途经 | 第11-13页 |
| ·木糖还原酶 | 第12-13页 |
| ·木糖醇脱氢酶 | 第13页 |
| ·木酮糖激酶 | 第13页 |
| ·代谢木糖酵母工程菌的研究进展 | 第13-17页 |
| ·细菌木糖异构酶基因在酿酒酵母中的表达 | 第14-15页 |
| ·树干毕赤酵母的木糖代谢基因在酿酒酵母中的表达 | 第15-17页 |
| ·酿酒酵母的转化体系 | 第17-19页 |
| ·用于基因表达的宿主菌选择 | 第17页 |
| ·选择标记 | 第17-18页 |
| ·载体的选择 | 第18页 |
| ·转化方法 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| ·研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 树干毕赤酵母木糖还原酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第22-40页 |
| 前言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23页 |
| ·主要溶液和培养基配制方法 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-32页 |
| ·树干毕赤酵母基因组的提取及DNA纯度浓度的检测 | 第24-25页 |
| ·目的基因的扩增 | 第25-27页 |
| ·载体pGMT-xyl1的构建与转化 | 第27-29页 |
| ·p424GPD-xyl1表达载体的构建 | 第29-31页 |
| ·表达产物的验证 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-39页 |
| ·总DNA提取 | 第32页 |
| ·PCR结果 | 第32-33页 |
| ·载体pGMT-xyl1的筛选与目的基因的测序分析 | 第33-35页 |
| ·p424GPD-xyl1表达载体的构建 | 第35-37页 |
| ·表达产物的验证 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 木糖还原酶基因在酿酒酵母中的表达 | 第40-54页 |
| 前言 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40-42页 |
| ·菌株和质粒 | 第40页 |
| ·工具酶 | 第40页 |
| ·主要实验仪器 | 第40-41页 |
| ·培养基和部分溶液配制 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·转化单倍体酿酒酵母 | 第42-44页 |
| ·单倍体酿酒酵母酶活的检测 | 第44页 |
| ·重组酵母的验证 | 第44-46页 |
| ·单倍体酿酒酵母的接合及二倍体的筛选 | 第46页 |
| ·二倍体酿酒酵母酶活的检测 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-51页 |
| ·重组单倍体酵母的筛选及酶活测定 | 第47-49页 |
| ·重组单倍体酵母PCR验证 | 第49-50页 |
| ·单倍体酿酒酵母的杂接合及二倍体的筛选 | 第50-51页 |
| ·二倍体酵母的木糖还原酶酶活的测定 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| 第四章 整合载体的构建 | 第54-66页 |
| 前言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·菌株和质粒 | 第54页 |
| ·工具酶 | 第54页 |
| ·主要实验仪器 | 第54-55页 |
| ·培养基和部分溶液配制 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-59页 |
| ·重组载体p424GPD-xyl1和整合载体YIP5的提取 | 第55页 |
| ·目的片段GPD-xyl1-CYC1的扩增 | 第55-57页 |
| ·整合载体YIP5-xyl1的构建 | 第57-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-63页 |
| ·目的片段GPD-xyl1-CYC1的扩增结果 | 第59页 |
| ·目的片段GPD-xyl1-CYC1及整合载体YIP5分步双酶切结果 | 第59-61页 |
| ·整合载体YIP5-xyl1的筛选与目的基因的测序分析 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| 第五章 结论与建议 | 第66-68页 |
| ·结论 | 第66页 |
| ·创新点 | 第66页 |
| ·建议 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录A 缩略词表 | 第76-78页 |
| 附录B DNA序列比对结果 | 第78-80页 |
| 附录C PGM-T载体图谱 | 第80-81页 |
| 附录D P424GPD表达载体及YIP5整合载体图谱 | 第81-82页 |
| 附录E 攻读硕士研究生期间的科研成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
