| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪言 | 第11-21页 |
| 引言 | 第11页 |
| ·脂肪酸去饱和酶的研究 | 第11-13页 |
| ·脂肪酸去饱和酶种类 | 第12页 |
| ·脂肪酸去饱和酶作用机制 | 第12-13页 |
| ·抗冻蛋白的作用机理 | 第13-18页 |
| ·抗冻蛋白的高级结构模型 | 第13-16页 |
| ·抗冻蛋白作用机理 | 第16-17页 |
| ·增强剂对抗冻蛋白活性的影响 | 第17-18页 |
| ·植物转抗冻蛋白基因研究 | 第18-19页 |
| ·研究目标和主要研究内容 | 第19-20页 |
| ·研究目标与意义 | 第19页 |
| ·主要研究内容 | 第19-20页 |
| ·本研究技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-39页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·胡萝卜抗冻蛋白(DCAFP)基因与黄粉虫抗冻蛋白(TMAFP)基因克隆 | 第21-29页 |
| ·试验材料及其来源 | 第22-23页 |
| ·胡萝卜(Daucus carota)与黄粉虫(Tentbrio molitor)幼虫RNA提取 | 第23-24页 |
| ·DcAFP基因与TmAFP基因cDNA第一链的合成 | 第24-25页 |
| ·DcAFP全长cDNA编码序列的分子克隆 | 第25-26页 |
| ·TmAFP全长cDNA编码序列的分子克隆 | 第26页 |
| ·DcAFP基因与TmAFP基因RT-PCR扩增产物的回收 | 第26-27页 |
| ·DcAFP基因与TmAFP基因回收产物与pMD18-T Simple载体连接 | 第27页 |
| ·连接反应产物转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5a | 第27-28页 |
| ·阳性克隆的质粒提取与酶切验证 | 第28-29页 |
| ·DCAFP基因与TMAFP基因的融合基因克隆 | 第29-31页 |
| ·融合基因中间模板克隆 | 第29-30页 |
| ·融合基因PCR扩增 | 第30页 |
| ·融合基因的PCR扩增产物回收 | 第30页 |
| ·融合基因回收产物与pMD18-T Simple载体连接 | 第30页 |
| ·连接反应产物转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α | 第30-31页 |
| ·阳性克隆的质粒酶切验证 | 第31页 |
| ·植物超量表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·pBI121大片段回收 | 第31-32页 |
| ·目的基因小片段回收 | 第32页 |
| ·目的基因小片度连接pBI121大片段 | 第32页 |
| ·连接反应产物转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α | 第32页 |
| ·阳性克隆的质粒酶切验证 | 第32页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第32-33页 |
| ·CaCL2法制备农杆菌感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·电击转化农杆菌GV3101 | 第33页 |
| ·农杆菌介导的花序侵染法转化拟南芥 | 第33-34页 |
| ·野生型拟南芥的培养 | 第33页 |
| ·菌液的制备及转化拟南芥(花序侵染法) | 第33-34页 |
| ·阳性植株的筛选 | 第34页 |
| ·转基因植株的PCR筛选 | 第34-36页 |
| ·CTAB法植物DNA的快速微量提取 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·REALTIME PCR检测转基因植株转录表达量 | 第36-37页 |
| ·Real-time PCR模板制备 | 第36页 |
| ·Real-time PCR引物设计 | 第36-37页 |
| ·Real-time PCR反应 | 第37页 |
| ·转基因植株萌芽期-10℃低温试验分析 | 第37-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-57页 |
| ·胡萝卜抗冻蛋白(DcAFP)与黄粉虫抗冻蛋白(TMAFP)基因克隆 | 第39-40页 |
| ·胡萝卜(Daucus carota)与黄粉虫(Tentbrio molitor)幼节虫总RNA提取 | 第39页 |
| ·胡萝卜抗冻蛋白(DcAFP)基因cDNA克隆 | 第39-40页 |
| ·黄粉虫抗冻蛋白(TmAFP)基因cDNA克隆 | 第40页 |
| ·DcAFP基因与TMAFP基因的融合基因克隆 | 第40-42页 |
| ·中间模板的克隆 | 第41页 |
| ·融合基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·植物超量表达载体酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·转基因拟南芥筛选及基因组PCR鉴定 | 第43-46页 |
| ·转基因拟南芥T0代筛选 | 第43页 |
| ·T0代阳性植株基因组PCR鉴定 | 第43-46页 |
| ·转基因拟南芥REAL-TIME PCR表达量分析 | 第46-47页 |
| ·转基因植株萌芽期-10℃低温处理实验 | 第47-57页 |
| ·低温冻害后存活统计分析 | 第47-51页 |
| ·低温冻害后有叶片黄化的转基因植株黄花率统计分析 | 第51-57页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第57-61页 |
| ·DCAFP、TMAFP、Dc-TMAFP和TM-DcAFP基因cDNA全长克隆 | 第57-58页 |
| ·DCAFP、TMAFP、Dc-TMAFP和TM-DcAFP基因在转基因拟南芥中超量表达 | 第58页 |
| ·抗冻蛋白基因与拟南芥抗冻性相关 | 第58-59页 |
| ·创新点 | 第59页 |
| ·建议 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录A:缩略词表 | 第68-69页 |
| 附录B:攻读学位期间的主要学术成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
