| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 1 实验材料 | 第17-21页 |
| ·菌株和质粒载体和动物 | 第17页 |
| ·仪器 | 第17-18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·主要试剂配制 | 第18-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-44页 |
| ·基因克隆 | 第21-28页 |
| ·引物设计及合成 | 第21-22页 |
| ·Pcdh101、802、1701、1702同源性分析及抗原决定簇的预测 | 第22页 |
| ·1、 pcdh pcdh8和pcdh17部分基因片段的克隆 | 第22-24页 |
| ·目的片段的胶回收 | 第24-25页 |
| ·加A | 第25页 |
| ·pGEM-T Easy Vector克隆载体的构建 | 第25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25-26页 |
| ·质粒提取 | 第26页 |
| ·T-101、-802、-1701、-1702重组质粒的双酶切和PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·测序及Blast序列分析 | 第27-28页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第28-30页 |
| ·pGEX-2TK-101、-802、-1701和pET-32a-1702原核表达载体构建流程图 | 第28-29页 |
| ·pGEX-2TK-101、-802、-1701和pET-32a-1702原核表达载体的鉴定 | 第29-30页 |
| ·GST和(His)_6融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第30-36页 |
| ·GST-101、-802、-1701和(His)_6-1702融合蛋白的诱导表达 | 第30页 |
| ·GST-101、-802、-1701和(His)_6-1702融合蛋白的鉴定 | 第30页 |
| ·GST-101、-802、-1701和(His)_6-1702融合蛋白的纯化 | 第30-35页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳鉴定纯化的各融合蛋白 | 第35-36页 |
| ·免疫大鼠 | 第36-38页 |
| ·各纯化蛋白浓度的测定 | 第36页 |
| ·透析各纯化蛋白 | 第36-37页 |
| ·各融合蛋白的乳化 | 第37-38页 |
| ·免疫大鼠 | 第38页 |
| ·ELISA检测抗血清的效价 | 第38-41页 |
| ·ELISA检测GST-Pcdh101抗血清的效价 | 第38-39页 |
| ·ELISA检测GST-Pcdh802抗血清的效价 | 第39-40页 |
| ·ELISA检测GST-Pcdh1701抗血清的效价 | 第40页 |
| ·ELISA检测(His)_6-Pcdh1702抗血清的效价 | 第40-41页 |
| ·Western Blotting检测多克隆抗体的特异性 | 第41-43页 |
| ·Western Blotting检测抗体对免疫动物用的抗原的特异性 | 第41-42页 |
| ·Western Blotting检测抗体对鸡胚脑组织中表达的Pcdhs的特异性 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR从分子水平上检测Pcdh在各个时期的表达情况 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-69页 |
| ·Pcdh1、8、17跨膜区的分析 | 第44页 |
| ·101、802、1701、1702同源性分析及抗原决定簇的预测 | 第44-49页 |
| ·101、802、1701、1702目的片段的扩增 | 第49-51页 |
| ·pGEX-2TK-101、-802、-1701和pET-32a-1702原核表达载体构建 | 第51-52页 |
| ·重组载体的测序 | 第52-56页 |
| ·SDS-PAGE检测GST和(His)_6融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第56-57页 |
| ·ELISA检测多克隆抗体的效价 | 第57-63页 |
| ·ELISA检测抗GST-101多克隆抗体的效价 | 第57-59页 |
| ·ELISA检测抗GST-802多克隆抗体的效价 | 第59-60页 |
| ·ELISA检测抗GST-1701多克隆抗体的效价 | 第60-61页 |
| ·ELISA检测抗(His)_6-1702多克隆抗体的效价 | 第61-63页 |
| ·Western Blotting检测多克隆抗体的特异性 | 第63-68页 |
| ·Western Blotting检测抗GST-101多克隆抗体的特异性 | 第63-64页 |
| ·Western Blotting检测抗GST-802多克隆抗体的特异性 | 第64-66页 |
| ·Western Blotting检测抗GST-1701多克隆抗体的特异性 | 第66-68页 |
| ·Western Blotting检测抗(His)_6-1702多克隆抗体的特异性 | 第68页 |
| ·RT-PCR检测pcdh1、8、17在各个时期的表达情况 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| ·实验动物的选取 | 第69页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及纯化 | 第69-70页 |
| ·多克隆抗体的特异性鉴定 | 第70-71页 |
| ·前景展望 | 第71-72页 |
| 5 结论 | 第72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 综述 | 第76-92页 |
| 参考文献 | 第87-92页 |
| 附录 | 第92-94页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 个人简历 | 第96页 |
