| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-21页 |
| ·G 蛋白的研究现状 | 第9-14页 |
| ·hArap3 的研究现状 | 第14-16页 |
| ·hEFA6A 的研究现状 | 第16-18页 |
| ·E.coli T 蛋白 CM 的研究现状 | 第18-19页 |
| ·核磁方法指导下的蛋白质晶体优化 | 第19-21页 |
| 2 引言 | 第21-23页 |
| 3 材料和方法 | 第23-37页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第23页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·仪器 | 第23页 |
| ·重组蛋白基因的分子克隆 | 第23-29页 |
| ·引物的设计 | 第23-24页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第24页 |
| ·PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第24-25页 |
| ·DNA 片段的胶回收纯化 | 第25页 |
| ·目的基因片段和载体的双酶切 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的构建 | 第26页 |
| ·E.coli 感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的鉴定和测序 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第29-35页 |
| ·常用培养基的成分 | 第29-30页 |
| ·IPTG 诱导大肠杆菌表达重组蛋白 | 第30页 |
| ·大肠杆菌菌体的收集、重悬、破碎及离心 | 第30页 |
| ·Ni-NTA 柱的装配 | 第30-31页 |
| ·带有 His-tag 融合蛋白的 Ni-NTA 柱纯化 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白分子筛纯化 | 第32页 |
| ·重组蛋白离子交换纯化 | 第32-33页 |
| ·融合标签的切除 | 第33页 |
| ·12% SDS-PAGE 的电泳检测 | 第33-35页 |
| ·目的蛋白样品的标记，晶体的筛选和优化 | 第35-37页 |
| ·目的蛋白的15N 和 D，15N，13C 标记 | 第35-36页 |
| ·目的蛋白晶体的筛选与优化 | 第36-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-56页 |
| ·hArap3 蛋白 PH-Arf GAP 结构域的实验结果与分析 | 第37-44页 |
| ·h Arap3 蛋白 PH-ArfGAP 的前期研究成果 | 第37页 |
| ·Tev-PH-ArfGAP 的 Ni-NTA 柱纯化 | 第37-38页 |
| ·Tev-PH-ArfGAP 的 His-taq 标签酶切 | 第38-39页 |
| ·Thrombin-PH-ArfGAP 诱导 OD600的优化 | 第39-40页 |
| ·Thrombin-PH-ArfGAP 的 Ni-NTA 柱纯化和酶切 | 第40-41页 |
| ·PH-ArfGAP 的 Superdex75 柱纯化 U280吸收峰图 | 第41-42页 |
| ·PH-ArfGAP 的核磁1H-谱图 | 第42页 |
| ·PH-ArfGAP 的的异核单量子关系(1H,15N HSQC 谱图) | 第42-43页 |
| ·PH-ArfGAP 和 Arf6 的滴定实验 | 第43-44页 |
| ·PH-ArfGAP 的核磁三共振实验 | 第44页 |
| ·hEF6A 的 Sec7 结构域的初步研究 | 第44-51页 |
| ·hEF6A 的前期研究成果 | 第44-45页 |
| ·选定不同边界探索 Sec7 的稳定性状况 | 第45-46页 |
| ·PCR 扩增多个边界的目的基因 | 第46-47页 |
| ·不同边界 Sec7 的表达和 Ni-NTA 柱纯化 | 第47页 |
| ·不同边界 Sec7 结构域 Superdex200 柱纯化 | 第47-48页 |
| ·不同边界 Sec7 结构域纯化后的稳定性探索 | 第48-50页 |
| ·⑤号边界的1H,15N HSQC 谱图 | 第50-51页 |
| ·E.coli T 蛋白 CMT结构初步研究与分析 | 第51-56页 |
| ·PCR 扩增 CMT的目的基因和载体的测序 | 第51-52页 |
| ·融合蛋白的诱导表达、纯化及鉴定 | 第52-53页 |
| ·晶体试剂盒的初筛 | 第53页 |
| ·目的蛋白 CMT的1H,15N HSQC 谱图 | 第53-54页 |
| ·核磁方法指导下的 CMT晶体优化和衍射图谱 | 第54-56页 |
| 5 讨论 | 第56-60页 |
| ·hArap3 的 PH-ArfGAP 结构域的初步研究 | 第56-57页 |
| ·hEFA6A 的 Sec7 结构域的初步研究 | 第57-58页 |
| ·CMT的晶体初步表征和优化 | 第58-60页 |
| 6 结论 | 第60-62页 |
| ·hArap3 的 PH-ArfGAP 的初步研究成果 | 第60页 |
| ·hEFA6A 的 Sec7 的初步研究成果 | 第60页 |
| ·E.coli T 蛋白的 CMT结构域的初步研究成果 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
| 硕士期间公开发表的学术论文 | 第68页 |
