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ETEC K99、987P抗体PPA-ELISA检测方法的建立及基因工程菌K88-K99高密度发酵工艺的研究

中文摘要第1-11页
ABSTRACT第11-13页
1 前言第13-25页
   ·E.COLI 致病因子的研究进展第14-19页
     ·E.COLI 黏附素第14-18页
       ·K88 粘附素(F4)第15-16页
       ·K99 粘附素(F5)第16-17页
       ·987P 粘附素(F6)第17页
       ·F41 粘附素第17-18页
     ·肠毒素第18页
     ·毒力岛第18页
     ·重要的细菌抗原第18-19页
       ·菌体抗原第18-19页
       ·鞭毛抗原第19页
       ·荚膜抗原第19页
       ·菌毛抗原第19页
   ·仔猪腹泻性大肠杆菌基因工程疫苗及高密度发酵技术的研究进展第19-25页
     ·基因工程疫苗概述第19-20页
     ·肠毒素基因工程疫苗的研究第20-21页
     ·大肠埃希氏菌 K88-K99 双价基因工程疫苗第21-22页
     ·大肠杆菌高密度发酵的研究第22-23页
     ·免疫血清学实验技术第23-24页
     ·小结第24-25页
2 材料及方法第25-36页
   ·ETEC 菌毛蛋白 K99 抗体 PPA-ELISA 检测方法的建立第25-27页
     ·试剂及仪器第25页
     ·菌株及血清第25页
     ·K99 菌毛蛋白的制备第25页
     ·酶标板均一性测定第25-26页
     ·PPA-ELISA 反应条件优化第26页
     ·猪阳性血清最佳稀释倍数确定第26页
     ·CUT-OFF 值的确定第26页
     ·特异性试验第26页
     ·敏感性试验第26页
     ·重复性试验第26-27页
       ·批内重复实验第27页
       ·批间重复试验第27页
     ·符合性试验第27页
     ·临床应用第27页
   ·ETEC 菌毛蛋白 987P 抗体 PPA-ELISA 检测方法的建立第27-30页
     ·试剂及仪器第27-28页
     ·菌株及血清第28页
     ·987P 菌毛的制备第28页
     ·987P 兔阳性血清的制备第28页
     ·酶标板均一性测定第28页
     ·PPA-ELISA 反应条件优化第28-29页
     ·猪阳性血清最佳稀释倍数确定第29页
     ·CUT-OFF 值的确定第29页
     ·特异性试验第29页
     ·敏感性试验第29页
     ·重复性试验第29页
       ·批内重复实验第29页
       ·批间重复试验第29页
     ·符合性试验第29-30页
     ·临床应用第30页
   ·ETEC 基因工程菌 K88-K99 融合蛋白高密度发酵工艺的研究第30-36页
     ·试剂及仪器第30页
     ·菌株第30页
     ·培养基配制第30-32页
     ·菌株活化第32-33页
     ·发酵种子液的制备第33-34页
     ·培养基筛选第34页
     ·摇瓶发酵试验第34页
     ·培养基 PH 值的确定第34页
     ·诱导时机的确定第34页
     ·高密度发酵第34页
     ·菌落计数第34页
     ·蛋白可溶性分析第34-35页
     ·目的蛋白的定量第35-36页
3 结果第36-49页
   ·ETEC 菌毛蛋白 K99 抗体 PPA-ELISA 检测方法的建立第36-39页
     ·K99 菌毛蛋白的纯化第36页
     ·酶标板均一性测定第36页
     ·PPA-ELISA 反应条件的优化第36-37页
     ·CUT-OFF 值的确定第37页
     ·特异性实验第37-38页
     ·敏感性试验第38页
     ·重复性试验第38-39页
     ·符合性试验第39页
     ·临床应用第39页
   ·ETEC 菌毛蛋白 987P 抗体 PPA-ELISA 检测方法的建立第39-44页
     ·987P 菌毛蛋白的纯化第39-40页
     ·制备 987P 兔抗血清第40页
     ·酶标板均一性测定第40页
     ·PPA-ELISA 反应条件的优化第40页
     ·猪阳性血清最佳稀释度第40-41页
     ·CUT-OFF 值确定第41页
     ·特异性试验第41-42页
     ·敏感性试验第42页
     ·重复性试验第42-43页
     ·符合性试验第43页
     ·临床应用第43-44页
   ·ETEC 基因工程菌 K88-K99 融合蛋白高密度发酵工艺的研究第44-49页
     ·冻干菌种质量检测第44页
     ·确定培养基第44-45页
     ·2*YT+0.5%葡萄糖培养基表达蛋白情况第45页
     ·不同 PH 蛋白表达情况第45-46页
     ·诱导时机的确定第46页
     ·高密度发酵结果分析第46-47页
     ·细菌计数第47页
     ·蛋白可溶性分析第47-48页
     ·蛋白定量第48-49页
4 讨论第49-52页
   ·ETEC 菌毛蛋白 K99 抗体 PPA-ELISA 检测方法的建立第49-50页
   ·ETEC 菌毛蛋白 987P 抗体 PPA-ELISA 检测方法的建立第50-51页
   ·ETEC 基因工程菌 K88-K99 融合蛋白高密度发酵工艺的研究第51-52页
5 结论第52-53页
参考文献第53-60页
致谢第60-61页
所发表的文章第61页

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