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蛋白质酰基转移酶10参与拟南芥的发育及盐胁迫响应

中文摘要第1-11页
Abstract第11-14页
1 前言第14-29页
   ·蛋白质的翻译后修饰第14-15页
   ·蛋白质的酰基化修饰第15-17页
     ·N-棕榈酰化第16页
     ·S-棕榈酰化第16-17页
     ·蛋白质棕榈酰化的特征第17页
   ·蛋白质棕榈酰化修饰的功能第17-19页
   ·棕榈酰基转移酶第19-21页
     ·MBOAT 类棕榈酰基转移酶第19页
     ·Longin domain 类棕榈酰基转移酶第19-20页
     ·DHHC-CRD 类棕榈酰基转移酶第20-21页
   ·真核生物中棕榈酰基转移酶的功能及底物研究第21-27页
     ·酵母中的棕榈酰基转移酶的功能及底物第21-23页
     ·哺乳动物中的棕榈酰基转移酶的功能及底物第23-24页
     ·植物中的棕榈酰基转移酶的功能及底物第24-27页
       ·拟南芥中棕榈酰基转移酶的功能研究第24-25页
       ·拟南芥中棕榈酰基转移酶的底物研究第25-27页
   ·本研究的目的及其意义第27-29页
2 材料与方法第29-50页
   ·材料第29-30页
     ·植物材料及生长条件第29页
     ·菌株和质粒第29页
     ·酶及生化试剂第29-30页
     ·PCR 引物第30页
   ·方法第30-50页
     ·构建转基因植物表达载体第30-35页
       ·植物总 RNA 的提取(试剂盒法)第30页
       ·反转录第30-31页
       ·植物基因组 DNA 提取(小量法)第31页
       ·Phusion PCR 扩增第31-32页
       ·PCR 产物回收(试剂盒法)第32-33页
       ·TOPO 连接反应第33页
       ·大肠杆菌转化及质粒提取(试剂盒法)第33-34页
       ·DNA 序列测定第34页
       ·LR 反应第34页
       ·质粒 DNA 的酶切鉴定第34-35页
     ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化第35-37页
       ·根癌农杆菌 GV3101 感受态细胞的制备与转化第35-36页
       ·拟南芥的栽培及转化第36-37页
     ·qRT-PCR第37页
       ·引物设计及合成第37页
       ·反应条件及结果分析第37页
     ·原位杂交分析第37-42页
       ·材料的固定第37页
       ·材料的包埋第37-38页
       ·切片第38页
       ·探针标记第38-40页
       ·脱蜡、消化、乙酰化和杂交第40-41页
       ·洗片第41-42页
       ·检测第42页
     ·GUS 染色分析第42-43页
     ·GUS 染色后的石蜡切片第43页
       ·取材固定第43页
       ·脱水、透明、浸蜡、包埋第43页
       ·钌红染色第43页
     ·扫描电子显微镜观察第43-44页
     ·透射电子显微镜观察第44-45页
     ·拟南芥花粉萌发及染色分析第45-46页
     ·拟南芥叶表皮细胞形态观察第46页
     ·拟南芥叶肉原生质体的制备及转化第46-48页
     ·拟南芥胚珠光学切片观察第48页
     ·激光共聚焦扫描隧道显微镜观察及图像处理第48页
     ·药剂处理及荧光染料染色第48-50页
       ·FM4-64 染色第48页
       ·BFA 处理第48-49页
       ·2-BP 处理第49-50页
3 结果与分析第50-70页
   ·PAT10 功能缺失突变体的表型分析第50-58页
     ·PAT10 功能缺失突变体的鉴定第50-53页
       ·转录水平鉴定 PAT10 功能缺失突变体第50页
       ·pat10 的表型分析第50-53页
     ·pat10 雄配子体功能异常第53-55页
     ·pat10 雌配子体功能异常第55-58页
   ·PAT10 的表达模式及其蛋白的亚细胞定位分析第58-63页
     ·启动子连接报告基因分析 PAT10 表达模式第58页
     ·原位杂交实验分析 PAT10 的表达模式第58-59页
     ·pat10 的功能互补实验及蛋白质亚细胞定位研究第59-63页
       ·pat10 的功能互补实验第59页
       ·PAT10 的亚细胞定位研究第59-62页
       ·PAT10 的功能由其酶活性体现第62-63页
   ·PAT10 的功能及底物研究第63-70页
     ·pat10 纯合突变体对盐处理超敏感第63-65页
     ·PAT10 通过棕榈酰化调控 CBL2/3/6 的液泡膜定位第65-70页
4 讨论第70-74页
   ·拟南芥 PAT10 通过蛋白质棕榈酰化调控液泡的功能第70-71页
   ·拟南芥 PAT10 的底物第71-72页
   ·PAT10 的亚细胞运输第72-74页
5 结论第74-75页
参考文献第75-87页
致谢第87-88页
攻读学位期间发表论文情况第88页

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