| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-37页 |
| 1 ORSV/CymMV病毒简介及模式寄主 | 第15-19页 |
| ·齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV) | 第15-17页 |
| ·建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV) | 第17-19页 |
| ·病毒模式寄主的确立 | 第19页 |
| 2 CymMV与ORSV的检测方法 | 第19-23页 |
| ·生物学检测法 | 第20页 |
| ·电镜观察 | 第20-21页 |
| ·血清学检测 | 第21页 |
| ·分子生物学方法 | 第21-23页 |
| ·反转录聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第21-22页 |
| ·Northern Blot | 第22-23页 |
| 3 RNA沉默作用机制及其抗病毒应用 | 第23-27页 |
| ·RNA沉默(RNA silencing)机制简介 | 第23-26页 |
| ·RNA沉默的发现 | 第23-24页 |
| ·RNA沉默过程 | 第24-26页 |
| ·RNA沉默的特点 | 第26页 |
| ·RNA沉默在植物抗病毒方面的应用 | 第26-27页 |
| 4 农杆菌渗入法介导的基因瞬时表达技术及应用 | 第27-31页 |
| ·技术介绍 | 第27-29页 |
| ·技术原理 | 第28页 |
| ·技术流程 | 第28-29页 |
| ·技术应用 | 第29-31页 |
| ·外源基因表达 | 第29-30页 |
| ·转录后基因沉默研究 | 第30页 |
| ·检测转基因的表达 | 第30页 |
| ·启动子对表达调控的研究 | 第30-31页 |
| 5 植物抗病毒基因工程研究 | 第31-34页 |
| ·植物抗病毒基因工程策略 | 第31-33页 |
| ·外壳蛋白基因 | 第31-32页 |
| ·复制酶基因 | 第32-33页 |
| ·运动蛋白基因 | 第33页 |
| ·转基因技术在植物抗病毒上的应用 | 第33-34页 |
| ·农杆菌介导法 | 第33-34页 |
| ·基因枪轰击 | 第34页 |
| 6 研究目的与意义 | 第34-37页 |
| 第二章 ORSV和CymMV病毒侵染本氏烟的鉴定 | 第37-43页 |
| 1 材料 | 第37页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·分子生物学试剂 | 第37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-39页 |
| ·RT-PCR检测感病蝴蝶兰 | 第37-39页 |
| ·总RNA的提取 | 第38页 |
| ·反转录 | 第38页 |
| ·PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·病汁液的提取 | 第39页 |
| ·健康本氏烟摩擦接种病汁液 | 第39页 |
| ·RT-PCR检测接种本氏烟 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-41页 |
| ·RT-PCR检测蝴蝶兰感病情况 | 第39-40页 |
| ·病毒接种本氏烟后植株叶片产生病症 | 第40-41页 |
| ·RT-PCR检测接种本氏烟 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 ORSV/CymMV沉默载体的沉默效应检测 | 第43-59页 |
| 1 材料 | 第43-44页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·菌种与载体 | 第43页 |
| ·分子生物学试剂 | 第43页 |
| ·引物 | 第43-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-48页 |
| ·重组载体的摇菌 | 第44页 |
| ·ORSV/CymMV沉默载体处理本氏烟植株 | 第44页 |
| ·ORSV/CymMV沉默载体与病汁液共处理本氏烟植株 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR检测ORSV/CymMV沉默载体处理的本氏烟植株 | 第45页 |
| ·Northern Blot分析 | 第45-46页 |
| ·Westhern Blot分析 | 第46-48页 |
| 3 实验结果 | 第48-56页 |
| ·ORSV/CymMV沉默载体处理本氏烟后植株正常生长 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR检测ORSV/CymMV沉默载体处理的本氏烟 | 第49-50页 |
| ·ORSV/CymMV沉默载体与病汁液共处理本氏烟后植株生长状况 | 第50-52页 |
| ·半定量PCR(sqRT-PCR)检测本氏烟体内病毒CP基因的表达量 | 第52-53页 |
| ·探针标记效率的检测 | 第53-54页 |
| ·Northern Blot分析本氏烟体内病毒基因组的表达量 | 第54-55页 |
| ·感病蝴蝶兰接种病毒沉默载体后病毒外壳蛋白的表达量下降 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 抗病毒转基因本氏烟的培养及siRNA检测 | 第59-73页 |
| 1 材料 | 第59-60页 |
| ·植物材料 | 第59页 |
| ·菌种与载体 | 第59页 |
| ·分子生物学试剂 | 第59页 |
| ·引物 | 第59-60页 |
| 2 实验方法 | 第60-65页 |
| ·转基因本氏烟的培养 | 第60-61页 |
| ·本氏烟叶片的预培养 | 第60页 |
| ·农杆菌浸润本氏烟叶片 | 第60-61页 |
| ·本氏烟愈伤组织的出芽培养 | 第61页 |
| ·本氏烟生根培养 | 第61页 |
| ·生根本氏烟炼苗、土培 | 第61页 |
| ·转基因本氏烟的检测 | 第61-62页 |
| ·本氏烟基因组DNA的提取(TBS提取法) | 第61页 |
| ·PCR检测转基因本氏烟 | 第61-62页 |
| ·Northern blot检测转基因本氏烟的siRNA | 第62-65页 |
| ·本氏烟sRNA的提取 | 第62-63页 |
| ·15% 8M Urea PAGE凝胶电泳 | 第63-64页 |
| ·sRNA转移至尼龙膜 | 第64页 |
| ·杂交 | 第64页 |
| ·显色 | 第64-65页 |
| 3 实验结果与分析 | 第65-69页 |
| ·本氏烟叶片的预培养 | 第65页 |
| ·本氏烟愈伤组织出芽 | 第65-66页 |
| ·本氏烟生根 | 第66页 |
| ·本氏烟炼苗、土培 | 第66-67页 |
| ·PCR检测转基因本氏烟结果 | 第67-68页 |
| ·Northern blot分析转基因本氏烟siRNA结果 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-73页 |
| 研究结果 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 附录1：常用试剂及配方 | 第81-88页 |
| 附录2：缩略词表 | 第88-90页 |
| 附录3：pXGY1-CymMV,pXGY1-ORSV载体序列及图谱 | 第90-91页 |
| 个人简历 | 第91-92页 |
