| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 序言 | 第11-18页 |
| 参考文献 | 第13-18页 |
| 第一部分 Dvl腺病毒载体的构建、包装及扩增 | 第18-39页 |
| 1. 实验材料 | 第19-23页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·基本试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-22页 |
| ·试剂配制 | 第22-23页 |
| 2. 实验方法 | 第23-31页 |
| ·全骨髓法培养原代MSCs | 第23页 |
| ·腺病毒表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·Dvl及其结构缺失突变体△DIX和△DEP的cDNA克隆 | 第24-26页 |
| ·PCR产物回收及TA克隆 | 第26-27页 |
| ·XLB感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·提取TA克隆质粒PCR及双酶切鉴定及测序 | 第28-29页 |
| ·Dvl及各突变体穿梭载体质粒的构建 | 第29页 |
| ·重组腺病毒载体构建 | 第29-30页 |
| ·重组腺病毒的包装、扩增 | 第30页 |
| ·重组病毒子效价检测 | 第30页 |
| ·病毒感染复数测定 | 第30-31页 |
| 3. 实验结果 | 第31-35页 |
| ·MSCs的形态学观察 | 第31页 |
| ·TA克隆Dvl及其结构缺失突变体△DIX和△DEP | 第31-33页 |
| ·重组穿梭载体的构建和鉴定 | 第33页 |
| ·Ad-Dvl、Ad-ΔDEP和Ad-△DIX病毒载体的重组及鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组病毒子的获得 | 第34页 |
| ·病毒感染复数测定 | 第34-35页 |
| 4. 讨论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-39页 |
| 第二部分 Wnt/β-catenin信号通路对MSCs迁移的影响 | 第39-58页 |
| 1. 实验材料 | 第40-43页 |
| ·基本试剂 | 第40-41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| ·主要试剂配制 | 第41-43页 |
| 2. 实验方法 | 第43-46页 |
| ·Boyden chamber研究Wnt信号通路对MSCs迁移的影响 | 第43-44页 |
| ·Dunn chamber研究Wnt信号通路对MSCs迁移的影响 | 第44-45页 |
| ·Western blot研究Wnt3a促发的Wnt信号通路 | 第45-46页 |
| ·细胞免疫荧光染色观察MSCs细胞骨架重排的变化 | 第46页 |
| 3. 实验结果 | 第46-53页 |
| ·改变Wnt/β-catenin信号通路对MSCs迁移的影响 | 第46-50页 |
| ·JNK参与调节Wnt3a及DKK1促进的MSCs迁移 | 第50-52页 |
| ·Wnt3a及DKK1对MSCs中细胞骨架重组情况的研究 | 第52-53页 |
| 4. 讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 第三部分 Dvl调控MSCs的定向迁移 | 第58-78页 |
| 1. 实验材料 | 第59页 |
| ·仪器设备 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| 2. 实验方法 | 第59-63页 |
| ·RT-PCR及q-PCR检测MSCs中Dvl基因的表达 | 第59-62页 |
| ·siRNA干扰MSCs中的Dvl,降低Dvl的表达水平 | 第62-63页 |
| ·Ad-Dvl、Ad-△DIX和Ad-△DEP病毒子感染MSCs细胞 | 第63页 |
| 3. 实验结果 | 第63-72页 |
| ·实时荧光定量PCR检测MSC中Dvl的表达 | 第63-65页 |
| ·抑制Dvl的表达对MSCs迁移的影响 | 第65-67页 |
| ·抑制Dvl的表达对MSCs细胞骨架重排的影响 | 第67-68页 |
| ·验证Ad-Dvl在MSCs中的表达 | 第68-69页 |
| ·改变Dvl表达对Wnt信号通路调节MSCs迁移的影响 | 第69-70页 |
| ·改变Dvl表达对HGF诱导的MSCs定向迁移的影响 | 第70-72页 |
| ·改变Dvl表达对Wnt信号激活的情况 | 第72页 |
| 4. 讨论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 综述：Dishevelled(Dsh/Dvl)与干细胞迁移的关系 | 第80-96页 |
| 参考文献 | 第88-96页 |
| 缩略词表 | 第96-98页 |
| 攻读学位期间发表的论文和所获的奖励 | 第98-99页 |
| 本研究所获基金资助 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
