| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-28页 |
| ·日本血吸虫 | 第14-17页 |
| ·日本血吸虫概述 | 第14页 |
| ·日本血吸虫的生活史 | 第14-15页 |
| ·日本血吸虫的致病性及危害 | 第15-16页 |
| ·日本血吸虫病的诊断与防治 | 第16-17页 |
| ·日本血吸虫的基因组 | 第17页 |
| ·RIO蛋白激酶 | 第17-28页 |
| ·RIO蛋白激酶概述 | 第17-19页 |
| ·RIO激酶的一级结构特征 | 第19-20页 |
| ·RIO激酶的空间结构 | 第20-23页 |
| ·RIO激酶家族的功能 | 第23-28页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 3 材料与方法 | 第29-49页 |
| ·试验材料 | 第29-33页 |
| ·试验动物 | 第29页 |
| ·菌种与质粒 | 第29页 |
| ·主要试剂和酶 | 第29页 |
| ·溶液的配制 | 第29-32页 |
| ·主要仪器与设备 | 第32-33页 |
| ·试验方法 | 第33-49页 |
| ·日本血吸虫成虫的收集 | 第33页 |
| ·引物的设计与合成 | 第33-34页 |
| ·日本血吸虫总RNA的提取 | 第34页 |
| ·3'-RACE第一链反应物的合成 | 第34-35页 |
| ·3'-RACE扩增Sj-Rio1和Sj-Rio2基因3’末端序列 | 第35-36页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段大小 | 第36页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第36页 |
| ·目的DNA连接pMD19-T载体 | 第36-37页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第37页 |
| ·连接产物转化DH5a感受态细胞 | 第37页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增日本血吸虫Rio1基因的ORF片段 | 第38页 |
| ·PCR扩增日本血吸虫Rio2基因的ORF片段 | 第38-39页 |
| ·质粒DNA的小量提取和鉴定 | 第39-40页 |
| ·Northern杂交 | 第40-42页 |
| ·质粒DNA的双酶切 | 第42页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·原核表达载体的鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒原核表达条件的优化 | 第43页 |
| ·重组质粒大量表达靶蛋白 | 第43-44页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2截短蛋白的原核表达 | 第44页 |
| ·GST融合蛋白的纯化 | 第44页 |
| ·His融合蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第45页 |
| ·日本血吸虫Riol和Rio2蛋白多克隆抗体的制备 | 第45-46页 |
| ·ELISA测定多抗血清效价 | 第46页 |
| ·Western blot | 第46-47页 |
| ·日本血吸虫组织蛋白提取 | 第47页 |
| ·Western blot检测制备多克隆抗体的免疫反应活性 | 第47-49页 |
| 4 结果与分析 | 第49-71页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2基因cDNA全长序列的获得 | 第49-55页 |
| ·日本血吸虫总RNA提取 | 第49页 |
| ·3'-RACE扩增日本血吸虫Rio1和Rio2的3’端DNA片段 | 第49-53页 |
| ·PCR扩增日本血吸虫Rio1和Rio2 ORF片段 | 第53-55页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2生物信息学分析 | 第55-60页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2基因结构分析 | 第55-56页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2分子进化分析 | 第56-57页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2保守结构域分析 | 第57-59页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2蛋白性质预测 | 第59-60页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2的mRNA Northern杂交 | 第60-61页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2 ORF全长的原核表达 | 第61-63页 |
| ·重组日本血吸虫Rio1蛋白的原核表达 | 第61-62页 |
| ·重组日本血吸虫Rio2蛋白的原核表达 | 第62-63页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2截短序列的原核表达 | 第63-67页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2截短序列的原核表达载体构建 | 第63-64页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2重组截短蛋白的诱导表达 | 第64-66页 |
| ·重组日本血吸虫Rio1和Rio2截短蛋白的纯化 | 第66-67页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第67-68页 |
| ·抗日本血吸虫Rio1和Rio2多克隆抗血清的效价测定 | 第67-68页 |
| ·抗日本血吸虫Rio1和Rio2多克隆抗体的免疫反应性 | 第68页 |
| ·Western blot确定日本血吸虫组织中Rio1或Rio2蛋白 | 第68-71页 |
| ·重组GST-Rio1或GST-Rio2蛋白的Western blot | 第68-69页 |
| ·日本血吸虫总蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第69页 |
| ·日本血吸虫体内Rio1和Rio2蛋白的Western blot | 第69-71页 |
| 5 讨论 | 第71-74页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2基因生物信息学分析 | 第71-72页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2的Northern杂交 | 第72页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2的蛋白表达 | 第72-73页 |
| ·日本血吸虫Rio1和Rio2的多克隆抗体及应用 | 第73-74页 |
| 6 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 附录 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
