卵泡抑素对牛颗粒细胞调控机制的研究
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-18页 |
| ·卵泡抑素的研究进展 | 第11-12页 |
| ·卵泡抑素基本结构 | 第11页 |
| ·卵泡抑素的生理作用 | 第11-12页 |
| ·卵泡抑素在颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁中可能的机制 | 第12-16页 |
| ·活化素诱导颗粒细胞的凋亡 | 第12-13页 |
| ·卵泡抑素与活化素相互作用机制 | 第13-16页 |
| ·卵泡抑素的主要研究手段进展 | 第16-17页 |
| ·卵泡抑素主要研究方法 | 第16页 |
| ·RNA干扰技术研究卵泡抑素 | 第16-17页 |
| ·本试验目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 材料 | 第18-25页 |
| ·试验细胞 | 第18页 |
| ·干扰载体 | 第18-19页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第19-20页 |
| ·主要试剂盒 | 第20页 |
| ·主要抗体 | 第20-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22页 |
| ·试剂的配置 | 第22-25页 |
| 3 方法 | 第25-35页 |
| ·黄牛颗粒细胞的分离与培养 | 第25页 |
| ·黄牛颗粒细胞表达FST的验证 | 第25-27页 |
| ·颗粒细胞总RNA的提取及cDNA第一链合成 | 第26页 |
| ·PCR扩增FST基因 | 第26-27页 |
| ·FST基因RNA干扰载体构建 | 第27-29页 |
| ·设计与合成shRNA序列 | 第27-28页 |
| ·退火 | 第28页 |
| ·重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·RNA干扰质粒的克隆与纯化提取 | 第29页 |
| ·FST干扰质粒转染黄牛颗粒细胞 | 第29-30页 |
| ·细胞的准备 | 第29页 |
| ·确定最优脂质体添加量 | 第29-30页 |
| ·FST干扰质粒转染黄牛颗粒细胞 | 第30页 |
| ·转染后FST及相关基因的相对表达量分析 | 第30-31页 |
| ·转染后颗粒细胞表达卵泡抑素的干扰效率检测 | 第30页 |
| ·检测卵泡抑素相关基因检测 | 第30-31页 |
| ·流式检测转染后细胞凋亡 | 第31页 |
| ·流式检测转染后细胞周期 | 第31-32页 |
| ·ELISA检测活化素、雌激素和孕激素浓度 | 第32-33页 |
| ·转染后卵泡抑素及凋亡和周期相关蛋白检测 | 第33-35页 |
| ·颗粒细胞总蛋白的提取 | 第33页 |
| ·颗粒细胞总蛋白含量的测定 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE电泳及蛋白成像 | 第33-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-46页 |
| ·验证颗粒细胞表达FST | 第35-36页 |
| ·FST干扰质粒鉴定、转染及干扰效果 | 第36-40页 |
| ·FST干扰质粒测序结果 | 第36-37页 |
| ·最优脂质体添加量 | 第37页 |
| ·FST干扰质粒转染效率 | 第37-39页 |
| ·两种FST干扰质粒对卵泡抑素干扰效果 | 第39-40页 |
| ·转染FST干扰质粒对黄牛颗粒细胞的影响 | 第40-46页 |
| ·转染对细胞周期的影响 | 第40-41页 |
| ·转染对凋亡的影响 | 第41-44页 |
| ·转染对颗粒细胞类固醇激素分泌量的影响 | 第44页 |
| ·转染对颗粒细胞抑制素各亚基及活化素受体的影响 | 第44-46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| 6 小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
