| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 参考文献 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1 弓形虫简介 | 第15-17页 |
| ·弓形虫的生活史 | 第15-16页 |
| ·弓形虫不同形态对环境的抵抗力 | 第16-17页 |
| ·获得性弓形虫病的传播方式 | 第17页 |
| 2 弓形虫病对人的危害 | 第17-19页 |
| ·先天性弓形虫病 | 第18页 |
| ·免疫缺陷者和免疫抑制者的获得性弓形虫病 | 第18页 |
| ·正常成人的弓形虫感染 | 第18-19页 |
| 3 散养鸡在人弓形虫传播中的地位 | 第19-20页 |
| 4 弓形虫感染的常见诊断方法 | 第20-23页 |
| ·病原学诊断方法 | 第20页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第20-21页 |
| ·血清学诊断方法 | 第21-23页 |
| 5 弓形虫感染ELISA抗体诊断方法研究现状以及ELISA诊断试剂盒质量现状 | 第23-25页 |
| ·弓形虫速殖子抗原研究情况 | 第23-24页 |
| ·国内市售ELISA诊断试剂盒质量现状 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-29页 |
| 第二章 Western blot筛选鸡弓形虫感染诊断抗原 | 第29-41页 |
| 摘要 | 第29页 |
| 1 实验材料 | 第29页 |
| 2 主要仪器 | 第29页 |
| 3 主要试剂及其配制 | 第29-31页 |
| 4 实验方法 | 第31-33页 |
| ·弓形虫的扩增和纯化 | 第31页 |
| ·鸡弓形虫人工感染模型的建立和血清采集 | 第31-32页 |
| ·速殖子全虫蛋白的提取 | 第32页 |
| ·全虫蛋白的SDS-PAGE | 第32页 |
| ·全虫蛋白的Western blot | 第32-33页 |
| 5 实验结果 | 第33-39页 |
| ·全虫蛋白的SDS-PAGE | 第33页 |
| ·全虫蛋白的Western blot | 第33-39页 |
| 6 讨论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-41页 |
| 第三章 38KD抗原蛋白切胶回收和双向电泳分离鉴定 | 第41-49页 |
| 摘要 | 第41页 |
| 1 材料 | 第41页 |
| 2 主要仪器 | 第41页 |
| 3 主要试剂耗材 | 第41-42页 |
| 4 方法 | 第42-45页 |
| ·蛋白切胶回收和样品制备 | 第42-43页 |
| ·双向电泳分离 | 第43-44页 |
| ·Western blot分析 | 第44页 |
| ·凝胶蛋白点的切取和MALDI-TOF-TOF检测 | 第44-45页 |
| 5 实验结果 | 第45-46页 |
| ·38KD抗原蛋白双向电泳和Western blot结果 | 第45-46页 |
| ·MALD1-TOF-TOF质谱鉴定结果 | 第46页 |
| 6 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-49页 |
| 第四章 GRA8蛋白以及Porin蛋白的原核表达 | 第49-65页 |
| 摘要 | 第49页 |
| 1 材料、菌种和载体 | 第49页 |
| 2 主要仪器 | 第49-50页 |
| 3 主要试剂耗材 | 第50页 |
| 4 方法 | 第50-57页 |
| ·弓形虫的扩增与纯化 | 第50页 |
| ·弓形虫总RNA的提取和cDNA的合成 | 第50-51页 |
| ·基因的RT-PCR扩增 | 第51-52页 |
| ·基因的克隆与表达 | 第52-56页 |
| ·重组蛋白抗原性的Western blot验证 | 第56页 |
| ·重组蛋白抗原性的ELISA验证 | 第56-57页 |
| 5 实验结果 | 第57-63页 |
| ·基因的PCR扩增 | 第57页 |
| ·pMD18T-GRA8与pMD18T-Porin的构建 | 第57-58页 |
| ·pET28a-Porin 与 pET28a-GRA8 的构建 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第59-60页 |
| ·重组蛋白的组氨酸亲和层析纯化 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白rGRA8与rPorin抗原性的Western blot结果 | 第61-62页 |
| ·重组蛋白rPorin抗原性的ELISA检验 | 第62-63页 |
| 6 讨论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-65页 |
| 第五章 GRA8-ELISA检验条件的建立和效果验证 | 第65-75页 |
| 摘要 | 第65页 |
| 1 材料、菌种和载体 | 第65页 |
| 2 主要仪器 | 第65-66页 |
| 3 主要试剂耗材 | 第66页 |
| 4 实验方法 | 第66-68页 |
| ·GRA8-ELISA最佳工作条件的确定 | 第66-67页 |
| ·间接ELISA测定的基本实验步骤 | 第67页 |
| ·ELISA阴阳性界限的确定 | 第67-68页 |
| ·弓形虫感染后不同时间血清抗体检出灵敏度的确定 | 第68页 |
| ·交叉反应实验 | 第68页 |
| 5 实验结果 | 第68-72页 |
| ·抗原最佳包被浓度和—抗血清最佳稀释度的确定(方阵滴定) | 第68-69页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第69页 |
| ·TMB最佳显色时间的确定 | 第69-70页 |
| ·ELISA阴阳性界限的确定 | 第70页 |
| ·弓形虫感染后不同时间血清抗体检出灵敏度的确定 | 第70-72页 |
| ·交叉反应实验 | 第72页 |
| 6 讨论 | 第72-75页 |
| 全文总结 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 附录 | 第79-80页 |
