| 学位论文数据集 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| ·前言 | 第17页 |
| ·磷脂简介 | 第17-18页 |
| ·磷脂的结构、性质及其来源 | 第17-18页 |
| ·磷脂的分析方法 | 第18页 |
| ·PS 简介 | 第18-19页 |
| ·特性 | 第18页 |
| ·PS 的制备与分离 | 第18-19页 |
| ·PLD 简介 | 第19-22页 |
| ·PLD 的来源 | 第20页 |
| ·PLD 的分离纯化 | 第20页 |
| ·PLD 的性质 | 第20-21页 |
| ·PLD 催化合成 PS 的体系 | 第21-22页 |
| ·基因重组表达体系构建及表达策略 | 第22-23页 |
| ·本研究课题的立题背景、研究意义 | 第23页 |
| ·论文研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 建立磷脂酰丝氨酸新检测方法 | 第25-34页 |
| ·原理 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·药品 | 第25-26页 |
| ·仪器 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-27页 |
| ·制备各种检测样品 | 第26页 |
| ·HPLC 检测 PSPC | 第26页 |
| ·LC-MS 检测 PCPS | 第26-27页 |
| ·HPLC-ELSD 检测丝氨酸降解 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-33页 |
| ·HPLC | 第27-28页 |
| ·LC-MS 检测 PC | 第28-30页 |
| ·LC-MS 检测 PS | 第30-32页 |
| ·HPLC 检测丝氨酸消耗量 | 第32-33页 |
| ·对比分析 | 第33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 酶的制备和酶学性质的研究 | 第34-45页 |
| ·简介 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·药品 | 第34-35页 |
| ·仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·粗酶的制备 | 第35页 |
| ·蛋白含量测定 | 第35页 |
| ·水解活性测定 | 第35-36页 |
| ·转酯活性测定 | 第36页 |
| ·分离纯化 | 第36页 |
| ·分子量研究 | 第36页 |
| ·磷脂酶 D 的 pH 和温度性质研究 | 第36-37页 |
| ·实验结果 | 第37-44页 |
| ·蛋白含量测定 | 第37-38页 |
| ·磷脂酶 D 水解活性的测定 | 第38页 |
| ·磷脂酶 D 转酯酶活的测定 | 第38-39页 |
| ·分离纯化和分子量 | 第39-40页 |
| ·磷脂酶 D 酶 pH 和温度性质研究 | 第40-41页 |
| ·动力学研究 | 第41-43页 |
| ·磷脂酶 D 的半衰期 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 反应体系条件的优化及响应面的建立 | 第45-51页 |
| ·前言 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·药品 | 第45页 |
| ·仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·PC、PA 制备 | 第45-46页 |
| ·缓冲溶液种类的选择 | 第46页 |
| ·有机溶剂的选择 | 第46页 |
| ·响应曲面的实验 | 第46-47页 |
| ·实验结果 | 第47-50页 |
| ·缓冲溶液种类的选择 | 第47-48页 |
| ·不同有机试剂对 PS 生成率的影响 | 第48页 |
| ·模型的建立 | 第48页 |
| ·方差分析 | 第48页 |
| ·响应曲面分析 | 第48-50页 |
| ·确定最优值 | 第50页 |
| ·验证实验 | 第50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 第五章 菌种的 16S rDNA 鉴定及磷脂酶 D 基因克隆与序列分析 | 第51-61页 |
| ·实验原理 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-54页 |
| ·菌株基因组的提取 | 第51-52页 |
| ·PCR 扩增 | 第52页 |
| ·16S rDNA 测序及分析 | 第52页 |
| ·简并引物的设计 | 第52-53页 |
| ·PCR 扩增 | 第53页 |
| ·生物信息学分析 | 第53-54页 |
| ·实验结果 | 第54-60页 |
| ·菌种基因组的提取和 PCR 扩增 | 第54页 |
| ·16S rDNA 测序及分析 | 第54-55页 |
| ·PLD 未知核酸序列研究结果 | 第55-56页 |
| ·生物信息学分析 | 第56-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第六章 磷脂酶 D 基因在原核工程菌中的重组构建与表达 | 第61-71页 |
| ·实验原理 | 第61页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-65页 |
| ·磷脂酶 D 基因的克隆 | 第62-63页 |
| ·质粒提取 | 第63页 |
| ·双酶切基因片段及质粒 | 第63页 |
| ·大肠杆菌 E.coli(BL21)感受态的化学法制备 | 第63页 |
| ·热击法转化 | 第63-64页 |
| ·菌落 PCR 体系 | 第64页 |
| ·重组大肠杆菌 pETDuet-1-PLD/BL21 的表达 | 第64页 |
| ·菌体浓度测定方法 | 第64-65页 |
| ·菌体破碎方法 | 第65页 |
| ·测定蛋白量 | 第65页 |
| ·测定重组磷脂酶 D 酶活 | 第65页 |
| ·实验结果与分析 | 第65-70页 |
| ·磷脂酶 D 基因的克隆 | 第65-67页 |
| ·蛋白含量测定 | 第67-68页 |
| ·菌体蛋白含量测定 | 第68-69页 |
| ·重组大肠杆菌 pETDuet-1-PLD /BL21 表达磷脂酶 D 的酶活测定 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第七章 结论与展望 | 第71-73页 |
| ·结论 | 第71页 |
| ·展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 研究成果和发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 作者及导师简介 | 第78-79页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第79-80页 |
