| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 缩略词表 | 第11-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-41页 |
| 1 胚胎干细胞 | 第17-19页 |
| ·胚胎干细胞鉴定 | 第17-18页 |
| ·细胞形态学鉴定 | 第17页 |
| ·碱性磷酸酶活性(AKP)和胚胎阶段特异性表面抗原(SSEA-1)鉴定 | 第17-18页 |
| ·胚胎干细胞体外培养 | 第18-19页 |
| ·胚胎干细胞的应用 | 第19页 |
| 2 生殖细胞 | 第19-22页 |
| ·精原干细胞特性 | 第20页 |
| ·精原干细胞体外培养 | 第20-21页 |
| ·精原干细胞的应用 | 第21-22页 |
| ·转基因动物生产 | 第21页 |
| ·临床应用 | 第21-22页 |
| 3 ES细胞诱导分化为雄性生殖细胞 | 第22-30页 |
| ·影响ES分化为雄性生殖细胞的因素 | 第22-26页 |
| ·内源性因素 | 第22-25页 |
| ·外源性因素 | 第25-26页 |
| ·ES向生殖细胞方向分化的诱导方法 | 第26-28页 |
| ·改变细胞的培养条件 | 第26-28页 |
| ·导入外源性基因 | 第28页 |
| ·体内诱导 | 第28页 |
| ·ES向生殖细胞方向分化的研究进展 | 第28-29页 |
| ·体外诱导ES分化为生殖细胞的应用前景 | 第29-30页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 5 参考文献 | 第31-41页 |
| 第二章 鸡胚ESC和SSCs形态学及差异蛋白标记的比较 | 第41-58页 |
| 1 材料与方法 | 第42-48页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEF)制备 | 第42页 |
| ·鸡胚成纤维细胞传代 | 第42-43页 |
| ·鸡胚成纤维细胞冻存 | 第43页 |
| ·鸡胚成纤维细胞解冻 | 第43页 |
| ·饲养层的制备 | 第43页 |
| ·获取鸡ES细胞和SSCs细胞 | 第43-44页 |
| ·ES细胞的培养及传代 | 第43-44页 |
| ·SSCs细胞的培养及传代 | 第44页 |
| ·碱性磷酸酶活性(AKP)活性鉴定 | 第44页 |
| ·胚胎阶段特异性表面抗原(SSEA-1)免疫荧光鉴定 | 第44页 |
| ·细胞RNA提取 | 第44-45页 |
| ·Reverse Transcription-PCR(RT-PCR)检测 | 第45-46页 |
| ·免疫细胞化学检测 | 第46-47页 |
| ·Western blot检测 | 第47-48页 |
| 2 结果 | 第48-52页 |
| ·ES细胞和SSCs细胞形态比较 | 第48-49页 |
| ·ES和SSCs细胞未分化状态检测 | 第49-50页 |
| ·ES和SSCs细胞mRNA水平上差异比较结果 | 第50-51页 |
| ·ES和SSCs细胞蛋白水平上差异比较结果 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 4 参考文献 | 第54-58页 |
| 第三章 视黄酸对鸡ESC向雄性生殖细胞分化的影响 | 第58-71页 |
| 1 材料和方法 | 第58-62页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·主要仪器和设备 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·ES细胞性别鉴定 | 第58-59页 |
| ·筛选适宜视黄酸浓度 | 第59-60页 |
| ·适宜浓度诱导ES细胞向生殖细胞方向分化 | 第60页 |
| ·荧光定量PCR检测特定基因的表达 | 第60-62页 |
| ·免疫细胞化学检测 | 第62页 |
| 2 结果 | 第62-66页 |
| ·雄性ES细胞筛选 | 第62-63页 |
| ·不同浓度诱导后细胞形态学变化 | 第63页 |
| ·半定量PCR检测不同浓度诱导后相关基因表达情况 | 第63页 |
| ·ES自分化实验组 | 第63-64页 |
| ·免疫细胞化学检测结果 | 第64页 |
| ·适宜视黄酸浓度诱导ES细胞形态变化 | 第64页 |
| ·荧光定量PCR检测RA诱导实验组基因变化结果 | 第64-65页 |
| ·免疫细胞化学检测结果 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-67页 |
| 4 参考文献 | 第67-71页 |
| 第四章 不同基质蛋白对ESC向雄性生殖细胞方向分化的影响 | 第71-83页 |
| 1 材料和方法 | 第71-72页 |
| ·实验材料 | 第71页 |
| ·主要仪器和设备 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71-72页 |
| ·筛选雄性ES细胞 | 第72页 |
| ·基质蛋白包被及雄性ES细胞接种培养 | 第72页 |
| ·荧光定量PCR检测特定基因的表达 | 第72页 |
| ·免疫细胞化学检测 | 第72页 |
| 2 结果 | 第72-76页 |
| ·细胞形态变化 | 第72-73页 |
| ·不同基质蛋白诱导后荧光定量检测基因表达情况 | 第73-75页 |
| ·免疫细胞化学检测结果 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-80页 |
| 4 参考文献 | 第80-83页 |
| 第五章 睾丸支持细胞、睾丸提取液及综合因素对ESC向雄性生殖细胞分化的影响 | 第83-104页 |
| 1 材料和方法 | 第83-88页 |
| ·实验材料 | 第83-84页 |
| ·主要仪器和设备 | 第84页 |
| ·主要试剂 | 第84页 |
| ·睾丸支持细胞原代分离 | 第84页 |
| ·支持细胞传代 | 第84页 |
| ·鸡胚支持细胞冻存 | 第84-85页 |
| ·鸡胚支持细胞解冻 | 第85页 |
| ·支持细胞鉴定 | 第85-86页 |
| ·油红染色 | 第85页 |
| ·支持细胞相关基因表达的检测 | 第85-86页 |
| ·丝裂霉素-C处理 | 第86页 |
| ·支持细胞与雄性ES细胞共培养 | 第86-87页 |
| ·不同时期睾丸组织提取液制备 | 第87页 |
| ·不同时期睾丸组织条件培养基提取 | 第87页 |
| ·睾丸组织提取液和条件培养基共同诱导ES细胞 | 第87-88页 |
| ·综合因素诱导组 | 第88页 |
| 2 结果 | 第88-98页 |
| ·支持细胞形态学观察 | 第88页 |
| ·油红O染色 | 第88页 |
| ·鸡胚支持细胞RT-PCR鉴定 | 第88-89页 |
| ·支持细胞和ES细胞共培养后细胞形态变化 | 第89-90页 |
| ·诱导后荧光定量检测相关基因表达情况 | 第90页 |
| ·免疫细胞化学检测特定蛋白表达情况 | 第90-91页 |
| ·不同时期睾丸组织提取液诱导组 | 第91-93页 |
| ·不同时期睾丸组织条件培养液诱导组 | 第93-96页 |
| ·综合因素诱导实验组结果 | 第96-98页 |
| 3 讨论 | 第98-101页 |
| 4 参考文献 | 第101-104页 |
| 第六章 SSCs体内介导法制备抗病转基因鸡 | 第104-114页 |
| 1 材料与方法 | 第104-106页 |
| ·试验材料 | 第104页 |
| ·睾丸注射 | 第104-105页 |
| ·睾丸冰冻切片检测 | 第105页 |
| ·人工授精 | 第105页 |
| ·PCR检测 | 第105-106页 |
| ·引物设计及合成 | 第105页 |
| ·PCR扩增检测 | 第105-106页 |
| ·睾丸组织基因组dot blotting检测 | 第106页 |
| ·RT-PCR检测EGFP-MMx基因的表达情况 | 第106页 |
| ·Western blot检测EGFP-MMx融合蛋白的表达 | 第106页 |
| 2 结果 | 第106-111页 |
| ·睾丸冰冻切片检测 | 第107页 |
| ·睾丸组织基因组PCR结果 | 第107-108页 |
| ·睾丸组织基因组dot blotting检测 | 第108页 |
| ·精液品质检测 | 第108-109页 |
| ·精液PCR检测结果 | 第109页 |
| ·F1代胚胎荧光检测结果 | 第109页 |
| ·血液PCR检测结果 | 第109-110页 |
| ·RT-PCR检测EGFP-MMx基因的表达结果 | 第110页 |
| ·Western blot检测结果 | 第110-111页 |
| 3 讨论 | 第111-112页 |
| 4 参考文献 | 第112-114页 |
| 第七章 结论和创新点 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 博士期间发表的论文 | 第116-117页 |
