| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 草莓镶脉病毒的研究概况 | 第11-14页 |
| ·草莓镶脉病毒的分布与危害 | 第11页 |
| ·草莓镶脉病毒侵染寄主后的症状 | 第11页 |
| ·草莓镶脉病毒的寄主及传播途径 | 第11-12页 |
| ·草莓镶脉病毒的基因组结构、功能及变异 | 第12-14页 |
| 2 病毒与植物寄主的互作 | 第14-16页 |
| ·植物寄主对病毒的防御反应 | 第14-15页 |
| ·病毒对寄主植物防御反应的应答 | 第15-16页 |
| 3 病毒的致病性相关因子 | 第16-19页 |
| 引言 | 第19-21页 |
| 材料与方法 | 第21-38页 |
| 1 供试材料 | 第21页 |
| ·病样来源 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌种和载体 | 第21页 |
| ·酶和化学试剂 | 第21页 |
| ·常用缓冲溶液和培养基 | 第21页 |
| ·抗生素 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| 2 试验方法 | 第21-38页 |
| ·叶片总 DNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·叶片总 RNA 的提取 | 第22-23页 |
| ·提 RNA 的准备工作 | 第22页 |
| ·Trizol 抽提液提取总 RNA 方法 | 第22-23页 |
| ·cDNA 的合成 | 第23页 |
| ·PCR 技术 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第24-27页 |
| ·PCR 产物回收和纯化 | 第24页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第24-25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·Ecoli DH5 α感受态细胞的少量制备（CaCl2法） | 第25页 |
| ·农杆菌感受态细胞的少量制备 | 第25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25-26页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第25-26页 |
| ·连接产物转化农杆菌（冻融法） | 第26页 |
| ·阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第26页 |
| ·质粒提取 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| ·克隆基因的测序、分析和登录 | 第27页 |
| ·SVBV P6 基因的克隆及序列分析 | 第27-29页 |
| ·扩增 SVBV 中国分离物 P6 基因的引物设计 | 第27-28页 |
| ·扩增 SVBV 美国分离物 P6 基因的引物设计 | 第28页 |
| ·SVBV 中国分离物 P6 基因的 PCR 扩增 | 第28页 |
| ·SVBV 美国分离物 P6 基因的 PCR 扩增 | 第28页 |
| ·SVBV P6 基因序列相似性分析 | 第28-29页 |
| ·SVBV P6 基因序列结构分析 | 第29页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第29-30页 |
| ·瞬间表达 SVBV P6 基因及其缺失突变体植物表达载体的构建策略 | 第29-30页 |
| ·转基因 SVBV P6 基因植物表达载体的构建策略 | 第30页 |
| ·植物表达载体的构建过程 | 第30-33页 |
| ·扩增 SVBV P6 基因的引物设计与合成 | 第30-31页 |
| ·扩增 SVBV P6 基因缺失突变体引物设计与合成 | 第31-32页 |
| ·SVBV P6 基因及其缺失突变体基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·SVBV P6 基因及其缺失突变体基因植物表达载体的构建 | 第33页 |
| ·重组植物表达载体导入农杆菌 | 第33页 |
| ·瞬间表达接种本氏烟 | 第33-34页 |
| ·瞬间表达烟草的 RT-PCR 检测 | 第34-35页 |
| ·半定量 RT-PCR | 第35页 |
| ·植物可溶性蛋白样品的制备 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE | 第35页 |
| ·Western Blot 分析 | 第35-36页 |
| ·植物病毒的 ELISA 检测 | 第36页 |
| ·烟草转化及卡那霉素抗性植株的获得 | 第36-37页 |
| ·转基因烟草阳性植株的检测 | 第37-38页 |
| 结果与分析 | 第38-51页 |
| 1 SVBV P6 基因的克隆及序列分析 | 第38-40页 |
| ·SVBV 中国分离物 P6 基因的 PCR 扩增 | 第38页 |
| ·SVBV 美国分离物 P6 基因的 PCR 扩增 | 第38页 |
| ·SVBV P6 基因阳性克隆的筛选 | 第38-39页 |
| ·SVBV P6 基因的序列分析 | 第39-40页 |
| 2 SVBV P6 基因植物表达载体的构建 | 第40-43页 |
| ·瞬间表达植物表达载体的构建 | 第40-42页 |
| ·SVBV P6 基因阳性克隆的获得 | 第40页 |
| ·pGR-CH P6 和 pGR-US P6 植物表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·SVBV P6 突变体基因（△P6）的克隆 | 第41页 |
| ·pGR-△CH P6 和 pGR-△US P6 植物表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·转基因植物表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·SVBV 中国分离物 P6 基因的克隆 | 第42页 |
| ·pCAM-CH P6 植物表达载体的构建 | 第42页 |
| ·SVBV 美国分离物 P6 基因的克隆 | 第42页 |
| ·pCAM-US P6 植物表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3 瞬间表达本氏烟的症状表型及相关检测 | 第43-47页 |
| ·瞬间表达本氏烟的症状表型 | 第43-45页 |
| ·瞬间表达 PVX 病毒载体片段的 RT-PCR 检测 | 第45页 |
| ·瞬间表达 P6 基因的 RT-PCR 检测 | 第45-46页 |
| ·瞬间表达本氏烟 P6 基因半定量 RT-PCR 检测 | 第46页 |
| ·瞬间表达本氏烟中 PVX 复制量的 ELISA 检测 | 第46-47页 |
| 4 转基因烟草阳性植株的获得、分子检测及症状表型 | 第47-50页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第47-49页 |
| ·转基因烟草植株的分子检测 | 第49页 |
| ·转基因阳性植株的症状表型 | 第49-50页 |
| 5 瞬间表达及转基因本氏烟中 P6 蛋白的 Western Blot 检测 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-54页 |
| 1 SVBV P6 基因序列的克隆与序列分析 | 第51页 |
| 2 SVBV 中、美分离物的 P6 基因表达载体及突变体表达载体接种本氏烟 | 第51-53页 |
| 3 P6 基因转化烟草的症状表型 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录A：常用缓冲液及培养基配方法 | 第60-65页 |
| 附录B：常用的抗生素和激素及使用浓度 | 第65页 |
| 附录C：常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第65-67页 |
| 附录D：本文所用的重要缩写词及中文对照 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
