| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-8页 |
| 文献综述 | 第8-22页 |
| 1 乳腺上皮细胞系培养研究进展 | 第8-13页 |
| ·牛乳腺上皮细胞培养及细胞系建立的研究进展 | 第8-10页 |
| ·永生化细胞系建立的机制 | 第10-13页 |
| ·病毒转染 | 第11页 |
| ·原癌基因介导 | 第11-12页 |
| ·p53突变体 | 第12页 |
| ·端粒酶 | 第12页 |
| ·放射性因素 | 第12-13页 |
| 2 乳腺相关细胞因子的研究进展及表达调控 | 第13-18页 |
| ·脂多糖在治疗乳房炎中的应用及其机理 | 第13-14页 |
| ·与脂多糖相关的细胞因子 | 第14-17页 |
| ·肿瘤坏死因子 | 第14-15页 |
| ·白细胞介素 | 第15-16页 |
| ·集落刺激因子 | 第16-17页 |
| ·干扰素 | 第17页 |
| ·脂多糖在乳腺细胞中研究进展 | 第17-18页 |
| 3 催乳激素及赖氨酸对乳腺相关功能基因表达的调控及其机制 | 第18-19页 |
| ·催乳激素对乳腺的刺激作用及其机理 | 第18-19页 |
| ·激素和赖氨酸互作效应对乳腺吸收氨基酸的作用及机理 | 第19页 |
| 4 本论文的研究意义及主要内容 | 第19-22页 |
| 试验一 奶牛乳腺上皮细胞的体外培养与鉴定 | 第22-36页 |
| 1 材料和方法 | 第22-27页 |
| ·试剂与材料 | 第22-23页 |
| ·组织来源 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·有关试剂的配置 | 第22-23页 |
| ·试验仪器 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-27页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的分离培养 | 第23-24页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的纯化 | 第24-25页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的传代 | 第25页 |
| ·细胞生长曲线的测定 | 第25页 |
| ·乳腺上皮细胞的形态学鉴定 | 第25页 |
| ·细胞角蛋白18的免疫荧光检测 | 第25-26页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞染色体核型分析 | 第26页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞表达β-酪蛋白基因的鉴定 | 第26-27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-32页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的分离培养及形态学观察 | 第27-29页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的纯化与传代 | 第29-31页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞生长特性 | 第31页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的荧光免疫鉴定 | 第31页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞染色体核型分析 | 第31-32页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞表达β-酪蛋白基因的鉴定 | 第32页 |
| 3 讨论 | 第32-35页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的生长特性 | 第32-33页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法 | 第33-34页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的纯化与传代 | 第34页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的鉴定方法 | 第34-35页 |
| 4 小结 | 第35-36页 |
| 试验二 脂多糖刺激奶牛乳腺上皮细胞IL-6、IL-8及TNF-α的mRNA表达 | 第36-46页 |
| 1 材料与方法 | 第36-39页 |
| ·试剂和器材 | 第36-37页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·刺激用液 | 第36页 |
| ·试验仪器 | 第36-37页 |
| ·试验步骤 | 第37-39页 |
| ·试验用的细胞 | 第37页 |
| ·LPS刺激培养 | 第37页 |
| ·RNA提取 | 第37页 |
| ·RNA检测 | 第37页 |
| ·RT-PCR检测细胞因子的mRNA表达 | 第37-39页 |
| ·凝胶电泳 | 第39页 |
| ·统计分析 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-44页 |
| ·RNA浓度和完整性 | 第39-40页 |
| ·IL-6、IL-8及TNF-α的mRNA表达随LPS浓度变化关系 | 第40-42页 |
| ·IL-6、IL-8及TNF-α的mRNA表达随时间变化关系 | 第42-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 试验三 催乳激素和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞分泌乳蛋白的影响 | 第46-57页 |
| 1 材料与方法 | 第46-50页 |
| ·试剂和器材 | 第46-47页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·有关试剂的配置 | 第46-47页 |
| ·试验器材 | 第47页 |
| ·试验步骤 | 第47-50页 |
| ·催乳激素刺激奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白的mRNA表达 | 第47页 |
| ·RT-qPCR | 第47-48页 |
| ·催乳激素和赖氨酸组合刺激对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白的mRNA表达影响 | 第48-49页 |
| ·ELISA法检测细胞上清液中β-酪蛋白和乳铁蛋白的含量 | 第49-50页 |
| ·数据处理 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-54页 |
| ·催乳激素和赖氨酸刺激奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白的mRNA表达影响 | 第50-53页 |
| ·ELISA法检测细胞上清液中β-酪蛋白和乳铁蛋白的表达 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| ·催乳激素对奶牛乳腺上皮细胞表达乳蛋白的影响 | 第54-55页 |
| ·赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞表达乳蛋白的影响 | 第55-56页 |
| 4 小结 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66-67页 |
