芋螺毒素Ma6A与MaI126的生物法合成研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词用表 | 第8-11页 |
| 第一部分:文献综述 | 第11-29页 |
| ·芋螺毒素研究概述 | 第11-22页 |
| ·芋螺及其生物学特征 | 第11-12页 |
| ·芋螺毒素研究进展 | 第12-22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达体系概述 | 第22-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达菌株 | 第22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达载体 | 第22-24页 |
| ·外源基因的转化与整合 | 第24页 |
| ·重组蛋白翻译后修饰 | 第24-25页 |
| ·巴斯德毕赤酵母高水平表达策略 | 第25-27页 |
| ·应用与前景 | 第27页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| ·实验技术路线 | 第28-29页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第29-44页 |
| ·材料 | 第29-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·成熟肽的设计与合成 | 第29页 |
| ·工具酶及试剂 | 第29页 |
| ·抗生素与培养基 | 第29-31页 |
| ·缓冲液以及试剂液 | 第31-33页 |
| ·仪器和设备 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-44页 |
| ·表达载体的构建 | 第34-38页 |
| ·酵母重组子的构建与筛选 | 第38-41页 |
| ·重组酵母转化子的诱导表达及检测 | 第41-43页 |
| ·表达条件优化 | 第43-44页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第44-58页 |
| ·分泌型表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·目的基因的退火 | 第44页 |
| ·载体的酶切与片段回收 | 第44-45页 |
| ·连接转化与菌液PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·酵母重组子的构建与筛选 | 第46-52页 |
| ·表达载体的线性化 | 第46-47页 |
| ·电转化酵母菌的条件优化 | 第47-48页 |
| ·酵母重组子的PCR初步鉴定 | 第48-50页 |
| ·PCR产物测序验证重组子 | 第50-52页 |
| ·酵母重组子的诱导表达及产物检测 | 第52-58页 |
| 第四部分 讨论 | 第58-62页 |
| ·芋螺毒素生物法合成(酵母重组表达)的可行性 | 第58-59页 |
| ·表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·芋螺毒素成熟肽序列的设计思路 | 第59页 |
| ·基因片段的退火和载体的连接 | 第59页 |
| ·PCR鉴定转化子 | 第59-60页 |
| ·酵母重组子的筛选鉴定 | 第60页 |
| ·酵母重组子筛选注意事项 | 第60页 |
| ·酵母重组子鉴定 | 第60页 |
| ·芋螺毒素基因酵母重组子诱导表达条件的优化 | 第60-62页 |
| 第五部分 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 作者在读期间科研成果简介 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
