| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一部分 寡肽荧光衍生条件和高效液相分析条件考察 | 第16-27页 |
| (一) 寡肽荧光衍生条件的优化 | 第16-21页 |
| 1.实验方法 | 第16-17页 |
| ·仪器与试药 | 第16-17页 |
| ·仪器 | 第16-17页 |
| ·试药 | 第17页 |
| ·溶液的配制 | 第17页 |
| ·荧光衍生方法 | 第17页 |
| ·HPLC色谱条件 | 第17页 |
| 2.实验结果 | 第17-21页 |
| ·加热时间考察 | 第17-18页 |
| ·加热温度考察 | 第18-19页 |
| ·反应介质浓度考察 | 第19页 |
| ·反应介质pH值考察 | 第19-20页 |
| ·儿茶酚浓度考察 | 第20-21页 |
| ·高碘酸钠浓度考察 | 第21页 |
| (二) 高效液相色谱条件的优化 | 第21-26页 |
| 1.实验方法 | 第21-22页 |
| ·仪器与试药 | 第21-22页 |
| ·仪器 | 第21页 |
| ·试药 | 第21-22页 |
| ·溶液的配制 | 第22页 |
| ·荧光衍生方法 | 第22页 |
| ·HPLC色谱条件 | 第22页 |
| 2.实验结果 | 第22-26页 |
| ·磷酸盐考察 | 第22页 |
| ·缓冲液浓度考察 | 第22-23页 |
| ·缓冲液pH值考察 | 第23-24页 |
| ·流动相比例优化 | 第24页 |
| ·检测波长考察 | 第24页 |
| ·考察优化色谱条件下混合体系分离情况 | 第24-26页 |
| (三) 小结 | 第26-27页 |
| 第二部分 新型荧光衍生方法测定亮氨酸脑啡肽并与紫外检测方法、OPA衍生法比较 | 第27-44页 |
| (一) 新型荧光衍生方法测定亮氨酸脑啡肽的含量 | 第28-35页 |
| 1 实验方法 | 第28-29页 |
| ·仪器与试药 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28页 |
| ·试药 | 第28页 |
| ·溶液的配制 | 第28页 |
| ·血样处理及测定 | 第28-29页 |
| ·荧光衍生方法 | 第29页 |
| ·HPLC色谱条件 | 第29页 |
| 2 实验结果 | 第29-35页 |
| ·体外系统中亮氨酸脑啡肽含量测定 | 第29-32页 |
| ·系统适应性实验 | 第29-30页 |
| ·标准曲线和线性范围 | 第30页 |
| ·精密度实验 | 第30-31页 |
| ·方法回收率实验 | 第31页 |
| ·检出限和定量限 | 第31-32页 |
| ·模拟血浆中亮氨酸脑啡肽含量测定 | 第32-35页 |
| ·系统适应性试验 | 第32页 |
| ·标准曲线和线性范围 | 第32-33页 |
| ·精密度实验 | 第33页 |
| ·准确度 | 第33-34页 |
| ·检出限和定量限 | 第34页 |
| ·稳定性实验 | 第34-35页 |
| (二) 紫外方法测定亮氨酸脑啡肽的含量 | 第35-39页 |
| 1 实验方法 | 第35-36页 |
| ·仪器与试药 | 第35页 |
| ·仪器 | 第35页 |
| ·试药 | 第35页 |
| ·溶液的配制 | 第35-36页 |
| ·色谱条件 | 第36页 |
| 2 实验结果 | 第36-39页 |
| ·系统适应性实验 | 第36页 |
| ·标准曲线和线性范围 | 第36-37页 |
| ·精密度实验 | 第37页 |
| ·回收率实验 | 第37-38页 |
| ·检出限和定量限 | 第38页 |
| ·稳定性实验 | 第38页 |
| ·模拟血浆实验 | 第38-39页 |
| (三) OPA衍生法测定亮氨酸脑啡肽的含量 | 第39-43页 |
| 1 实验方法 | 第39-40页 |
| ·仪器与试药 | 第39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·试药 | 第39页 |
| ·溶液的配制 | 第39-40页 |
| ·柱前衍生化反应 | 第40页 |
| ·色谱条件 | 第40页 |
| 2 实验结果 | 第40-43页 |
| ·系统适应性实验 | 第40-41页 |
| ·标准曲线和线性范围 | 第41页 |
| ·精密度实验 | 第41-42页 |
| ·回收率实验 | 第42页 |
| ·检出限和定量限 | 第42页 |
| ·稳定性实验 | 第42页 |
| ·OPA衍生化法模拟血浆实验考察 | 第42-43页 |
| (四) 讨论 | 第43-44页 |
| 第三部分 新型荧光衍生法-HPLC测定细胞凋亡关键酶caspase-3和caspase-8的活性 | 第44-97页 |
| (一) Caspase酶活性检测模型的建立和方法学考察 | 第48-60页 |
| 1 实验方法 | 第48-52页 |
| ·仪器与试药 | 第48-49页 |
| ·仪器 | 第48页 |
| ·试药 | 第48-49页 |
| ·细胞 | 第49页 |
| ·溶液的配制 | 第49页 |
| ·考马斯亮蓝测定蛋白含量方法 | 第49-50页 |
| ·荧光衍生方法 | 第50页 |
| ·HPLC色谱条件 | 第50页 |
| ·Caspase酶活性测定细胞模型的建立 | 第50-51页 |
| ·Caspase酶活性测定操作流程 | 第51-52页 |
| 2 实验结果 | 第52-60页 |
| ·考马斯亮蓝测定蛋白含量 | 第52-53页 |
| ·寡肽片段LG-2的方法学考察 | 第53-56页 |
| ·系统适应性实验 | 第53页 |
| ·标准曲线和线性范围 | 第53-54页 |
| ·精密度实验 | 第54页 |
| ·回收率实验 | 第54-55页 |
| ·提取回收率实验 | 第55页 |
| ·检出限和定量限 | 第55页 |
| ·稳定性 | 第55-56页 |
| ·寡肽片段AG-3的方法学考察 | 第56-60页 |
| ·系统适应性实验 | 第56-57页 |
| ·标准曲线和线性范围 | 第57-58页 |
| ·精密度实验 | 第58页 |
| ·回收率实验 | 第58页 |
| ·提取回收率实验 | 第58-59页 |
| ·检出限和定量限 | 第59页 |
| ·稳定性 | 第59-60页 |
| (二) 新型荧光衍生法测定Caspase酶活性 | 第60-81页 |
| 1 Caspase-3酶活性测定 | 第60-69页 |
| ·Hela细胞Caspase-3酶活性测定 | 第60-64页 |
| ·Hela细胞对照组测定 | 第60页 |
| ·低温辅助紫外照射诱导Hela细胞凋亡模型Caspase-3酶活性测定 | 第60-62页 |
| ·丝裂霉素C(MMC)诱导Hela细胞凋亡模型Caspase-3酶活性测定 | 第62-63页 |
| ·喜树碱诱导Hela细胞凋亡模型Caspase-3酶活性测定 | 第63-64页 |
| ·A549细胞Caspase-3酶活性测定 | 第64-69页 |
| ·A549细胞对照组Caspase-3酶活性测定 | 第64-65页 |
| ·低温辅助紫外照射诱导A549细胞凋亡模型Caspase-3酶活性测定 | 第65-67页 |
| ·丝裂霉素C(MMC)诱导A549细胞凋亡模型Caspase-3酶活性测定 | 第67-68页 |
| ·喜树碱诱导A549细胞凋亡模型Caspase-3酶活性测定 | 第68-69页 |
| 2 Caspase-8酶活性测定 | 第69-78页 |
| ·Hela细胞Caspase-8酶活性测定 | 第69-73页 |
| ·Hela细胞对照组测定 | 第69页 |
| ·低温辅助紫外照射诱导Hela细胞凋亡模型Caspase-8酶活性测定 | 第69-71页 |
| ·丝裂霉素C(MMC)诱导Hela细胞凋亡模型Caspase-8酶活性测定 | 第71-72页 |
| ·喜树碱诱导Hela细胞凋亡模型Caspase-8酶活性测定 | 第72-73页 |
| ·A549细胞Caspase-8酶活性测定 | 第73-78页 |
| ·A549细胞对照组Caspase-8酶活性测定 | 第73-74页 |
| ·低温辅助紫外照射诱导A549细胞凋亡模型Caspase-8酶活性测定 | 第74-75页 |
| ·丝裂霉素C(MMC)诱导A549细胞凋亡模型Caspase-8酶活性测定 | 第75-76页 |
| ·喜树碱诱导A549细胞凋亡模型Caspase-8酶活性测定 | 第76-78页 |
| 3 小结 | 第78-81页 |
| (三) 商用试剂盒测定Caspase酶活性 | 第81-92页 |
| 1 pNA标准曲线的测定 | 第81页 |
| 2 Caspase-3酶活性测定 | 第81-85页 |
| ·Hela细胞Caspase-3酶活性测定 | 第81-83页 |
| ·A549细胞Caspase-3酶活性测定 | 第83-85页 |
| 3 Caspase-8酶活性测定 | 第85-90页 |
| ·Hela细胞Caspase-8酶活性测定 | 第85-87页 |
| ·A549细胞Caspase-8酶活性测定 | 第87-90页 |
| 4 小结 | 第90-92页 |
| (四) 新型荧光衍生法和商用试剂盒比较 | 第92-95页 |
| 1 相对活性比较 | 第92-93页 |
| 2 专属性比较 | 第93-95页 |
| (五) 本章小结和讨论 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-100页 |
| 全文总结 | 第100页 |
| 本文创新 | 第100-101页 |
| 附录Ⅰ 细胞凋亡关键酶Caspase活性检测方法(综述) | 第101-113页 |
| 附录Ⅱ 发表论文 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
