英文缩略词表 | 第1-10页 |
中文摘要 | 第10-13页 |
英文摘要 | 第13-17页 |
1 前言 | 第17-18页 |
2 实验材料 | 第18-22页 |
·动物 | 第18页 |
·菌株、细胞株及质粒 | 第18-19页 |
·主要试剂 | 第19-20页 |
·引物及 siRNA | 第20-21页 |
·主要仪器与设备 | 第21-22页 |
3 实验方法 | 第22-32页 |
·主要试剂溶液的配方 | 第22-23页 |
·临床样本收集及处理 | 第23-24页 |
·健康人及 SLE、RA 及 AS 病人外周血样收集 | 第23页 |
·外周血白细胞分离 | 第23-24页 |
·重组质粒的构建及质粒提取 | 第24-28页 |
·引物设计及合成 | 第24页 |
·样本 RNA 的提取、定量 | 第24-25页 |
·RT 反应 cDNA 的制备 | 第25页 |
·常规 PCR 以及产物回收 | 第25-26页 |
·凝胶 DNA 片段的回收 | 第26页 |
·DNA 连接 | 第26-27页 |
·DH5α感受态细胞的制备 | 第27页 |
·质粒转化 | 第27页 |
·质粒的小量提取 | 第27-28页 |
·重组质粒酶切及测序鉴定 | 第28页 |
·使用 SYBR GreenⅠ进行 Real-time PCR 反应 | 第28-30页 |
·Real-time PCR 反应条件的优化 | 第28-29页 |
·定量标准曲线的制备 | 第29页 |
·重复性试验 | 第29-30页 |
·临床病例资料的整理分析 | 第30页 |
·病例对照分析 | 第30页 |
·临床指标与实验结果相关性分析 | 第30页 |
·细胞培养及转染 | 第30-32页 |
·肿瘤细胞 | 第30页 |
·原代细胞 | 第30-32页 |
·淋巴癌细胞株中 ATF6 基因沉默 | 第32页 |
·统计分析 | 第32页 |
4 结果 | 第32-52页 |
·临床样本的收集 | 第32-35页 |
·定量 PCR 方法的建立 | 第35-40页 |
·目的基因引物设计结果 | 第35页 |
·PCR 产物鉴定 | 第35-37页 |
·重组质粒的筛选 | 第37页 |
·定量 PCR 反应条件的优化 | 第37-38页 |
·定量 PCR 曲线的建立 | 第38-40页 |
·SYBR GreenⅠPCR 的重复性 | 第40页 |
·SLE、RA 及 AS 患者外周血 ER 应激相关基因的表达 | 第40-43页 |
·ATF6-siRNA 的设计和验证 | 第43-44页 |
·沉默 ATF6 后降低 EL4 对应激刺激的敏感性 | 第44-45页 |
·UPR 基因表达水平与 SLE 临床指标的相关性 | 第45-49页 |
·SLE 病人临床指标之间相关性分析 | 第45-46页 |
·SLE、RA 中 UPR 基因表达水平之间相关性分析 | 第46-48页 |
·SLE、RA 中 UPR 基因表达水平与临床指标的相关性分析 | 第48-49页 |
·丝裂原诱导的脾细胞活化与 ER 应激有关 | 第49-52页 |
·原代脾脏细胞分离及培养 | 第49-50页 |
·脾细胞中丝裂原诱导的 ER 应激相关基因表达 | 第50-52页 |
5 讨论 | 第52-55页 |
6 结论 | 第55-56页 |
7 本研究的创新点 | 第56页 |
8 参考文献 | 第56-60页 |
附录 | 第60-61页 |
致谢 | 第61-62页 |
综述 | 第62-78页 |
参考文献 | 第70-78页 |