| 摘要 | 第1-20页 |
| ABSTRACT | 第20-29页 |
| 缩写词表 | 第29-30页 |
| 研究背景 | 第30-32页 |
| Ⅰ 木质纤维素资源利用潜力巨大 | 第30-31页 |
| Ⅱ 利用中需要解决的问题 | 第31-32页 |
| 1 纤维素 | 第32-37页 |
| ·纤维素的基本结构 | 第32-35页 |
| ·纤维素影响水解的各种性质 | 第35-37页 |
| ·纤维素的结晶度(Crystallinity Index,CrI) | 第35页 |
| ·纤维素的聚合度(Degree of Polymerization,DP) | 第35-36页 |
| ·纤维素的可及性(Accessibility) | 第36-37页 |
| 2 纤维素分解微生物 | 第37-40页 |
| ·纤维素分解真菌(Cellulolytic Fungi) | 第37-39页 |
| ·纤维分解细菌(Cellulolytic bacteria) | 第39页 |
| ·纤维分解放线菌(Cellulolytic Actinomycete) | 第39-40页 |
| 3 纤维素酶 | 第40-45页 |
| ·纤维素酶系统的构成 | 第41-42页 |
| ·糖苷水解酶家族(Glycoside Hydrolase Family) | 第42-44页 |
| ·纤维素酶系统各组分的协同作用 | 第44-45页 |
| 4 纤维素酶水解纤维素活力的测定方法 | 第45-54页 |
| ·纤维素酶活力测定中的底物 | 第46-49页 |
| ·可溶性底物 | 第47页 |
| ·不溶性底物 | 第47-49页 |
| ·纤维素酶活力测定方法 | 第49-54页 |
| ·外切葡聚糖酶活力测定方法 | 第51页 |
| ·内切葡聚糖酶活力测定方法 | 第51-52页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活力测定方法 | 第52页 |
| ·总活力测定方法 | 第52-54页 |
| 5 典型真菌纤维素酶的结构变化与催化功能 | 第54-59页 |
| ·催化结构域及催化机理 | 第54-56页 |
| ·纤维素结合结构域的结构与功能 | 第56-57页 |
| ·连接肽桥 | 第57页 |
| ·酶—底物之间的结合过程 | 第57-59页 |
| 6 温度对酶催化过程的影响 | 第59-61页 |
| 7.数据分析中采用的方法 | 第61-63页 |
| ·实时测定反应进程的动态光谱法 | 第61页 |
| ·曲线的瞬变速率表征反应速率或者状态改变 | 第61-62页 |
| ·用曲线下的总面积(total area under curve,AUC)表征某一过程的总体变化 | 第62页 |
| ·实验数据的平滑与插值计算 | 第62-63页 |
| 8.论文的立题依据、可行性分析 | 第63-65页 |
| 第一章 纤维素酶制剂总糖化能力的评价方法 | 第65-75页 |
| ·材料与方法 | 第66-67页 |
| ·纤维素底物 | 第66页 |
| ·菌种 | 第66页 |
| ·粗酶样品的制备 | 第66-67页 |
| ·纤维素酶活力的测定 | 第67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-73页 |
| ·滤纸水解的动力学过程 | 第67-70页 |
| ·水解过程中水解速率与底物转化率之间的关系 | 第70-73页 |
| ·纤维素酶浓度的计算 | 第73页 |
| ·小结 | 第73-75页 |
| 第二章 纤维材料的酶水解的感受性 | 第75-90页 |
| ·材料与方法 | 第75-78页 |
| ·菌种 | 第75页 |
| ·粗酶样品的制备 | 第75-76页 |
| ·纤维素底物 | 第76页 |
| ·纤维素底物的水解 | 第76页 |
| ·傅立叶变换红外光谱分析 | 第76-77页 |
| ·以原子力显微镜测定纤维素样品的结构特性 | 第77页 |
| ·X-光衍射分析纤维素样品的结构特性 | 第77-78页 |
| ·美兰分子的表面积以及吸附方法 | 第78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-89页 |
| ·纤维素Ⅰ与纤维素Ⅱ的结构区别 | 第78-83页 |
| ·棉纤维与纤维素Ⅱ的酸/酶水解过程 | 第83-84页 |
| ·棉纤维、PH101与PASC表面积与无定形区的测定 | 第84-87页 |
| ·纤维素水解感受性的比较 | 第87-89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| 第三章 微分动态光谱法测定外切纤维素酶CBHI的催化活力 | 第90-105页 |
| ·材料与方法 | 第91-92页 |
| ·菌种 | 第91页 |
| ·固态发酵法制备纤维素酶粗酶 | 第91页 |
| ·外切葡聚糖酶的分离与纯化 | 第91页 |
| ·CBHI酶活力的经典测定方法 | 第91-92页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第92页 |
| ·蛋白质电泳 | 第92页 |
| ·外切酶的最适pH以及pH稳定性 | 第92页 |
| ·酶水解动态光谱的测定 | 第92页 |
| ·结果与讨论 | 第92-103页 |
| ·外切葡聚糖酶的CBHI纯化 | 第92-96页 |
| ·CBHI的最适pH的选择以及pH稳定性的测定 | 第96页 |
| ·CBHI,PNPC,PNP以及纤维二糖紫外光谱的特征 | 第96-97页 |
| ·醋酸缓冲液中PNPC与PNP混合溶液紫外光谱的比较 | 第97-99页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第99-100页 |
| ·优化反应条件以准确测定反应速率 | 第100-101页 |
| ·以不同浓度CBHI水解PNPC | 第101-102页 |
| ·K_(cat)的计算 | 第102-103页 |
| ·小结 | 第103-105页 |
| 第四章 CBHI与PNPC结合作用的机理 | 第105-128页 |
| ·材料与方法 | 第106-108页 |
| ·酶与底物的结合反应条件 | 第106-107页 |
| ·结合复合物紫外光谱的测定 | 第107页 |
| ·荧光发射光谱测定 | 第107页 |
| ·等温滴定量热(Isothermal titration calorimetry,ITC)试验(Fisher & Singh,1995;Leavitt & Freire,2001) | 第107页 |
| ·以Savitzky-Golay样条插值的方法平滑试验数据 | 第107-108页 |
| ·试验结果 | 第108-120页 |
| ·根据结合复合物与PNPC紫外光谱AUC_(370-400nm)的差别测定结合的SBP | 第108-110页 |
| ·以一定浓度的CBHI与不同浓度的PNPC结合,根据测定荧光淬灭的结果测定两者结合SBP的位置 | 第110-113页 |
| ·以ITC方法准确测定结合的化学计量——摩尔结合位点数 | 第113-115页 |
| ·在结合的SBP测定PNPC转化为PNP的构型变化 | 第115-117页 |
| ·以荧光发射二阶导数光谱表征结合处于SBP时CBHI的构象变化 | 第117-119页 |
| ·测定纤维二糖与PNP与CBHI的结合作用 | 第119-120页 |
| ·讨论 | 第120-127页 |
| ·以结合的化学计量(摩尔结合位点数)表征CBHI与PNPC相互作用的特性,而该参数可以通过结合饱和度的瞬变速率准确测定 | 第121-125页 |
| ·PNPC结合于CBHI是受饱和能力(saturability)(部分饱和程度,degree of fractional saturation)控制的不可逆过程 | 第125-126页 |
| ·催化过程中,PNPC构型改变的热力学动力可能来自于结合过程中CBHI构象的循环变化 | 第126页 |
| ·CBHI催化结构域内的色氨酸残基在PNPC的结合过程中发挥作用 | 第126-127页 |
| ·小结 | 第127-128页 |
| 第五章 温度对CBHI水解PNPC影响机理的研究 | 第128-162页 |
| ·材料与方法 | 第135-137页 |
| ·CBHI与PNPC | 第135页 |
| ·酶水解动态光谱的测定 | 第135页 |
| ·红外光谱分析 | 第135页 |
| ·荧光发射光谱测定 | 第135-136页 |
| ·圆二色谱测定 | 第136页 |
| ·以海藻酸钠制作固定化CBHI,并测定酶活力的方法 | 第136-137页 |
| ·等温滴定量热(ITC)试验 | 第137页 |
| ·以Savitzky-Golay样条插值法平滑试验数据 | 第137页 |
| ·CBHI水解PNPC过程中,温度和时间过程对催化和热稳性的综合影响 | 第137-148页 |
| ·不同温度下CBHI水解PNPC的反应时间过程 | 第137-141页 |
| ·以复合函数法计算温度和时间过程对瞬时速率v_(inst)的综合影响 | 第141-144页 |
| ·CBHI水解PNPC反应过程中,温度和时间过程对瞬时增量(v_(inc))的影响分析 | 第144-146页 |
| ·海藻酸钠固定化CBHI连续水解PNPC | 第146页 |
| ·讨论 | 第146-148页 |
| ·温度对酶催化反应以及Arrhenius活化能的影响 | 第148-153页 |
| ·对c-v_(inst)对温度曲线进行合理近似以得到R_(net) | 第148-149页 |
| ·以R_(net)作为独立变量,根据Arrhenius作图法计算表观活化能 | 第149-150页 |
| ·出现负活化能是糖苷水解酶共有的现象 | 第150-151页 |
| ·讨论 | 第151-153页 |
| ·应用ITC技术研究温度对CBHI催化PNPC的影响 | 第153-161页 |
| ·以ITC技术直接测定CBHI结合和水解PNPC的热力学参数 | 第153-156页 |
| ·探索确定催化和热力学关系的新途径——亲和力分析 | 第156-158页 |
| ·讨论 | 第158-161页 |
| ·本章小结 | 第161-162页 |
| 第六章 生物质资源利用的思考 | 第162-172页 |
| ·材料与方法 | 第162-164页 |
| ·菌种 | 第162-163页 |
| ·纤维质底物 | 第163页 |
| ·乙醇发酵 | 第163页 |
| ·乙醇的检测 | 第163-164页 |
| ·生孢噬纤维粘菌转化多糖 | 第164页 |
| ·糖与蛋白的测定方法 | 第164页 |
| ·结果与讨论 | 第164-171页 |
| ·农业废弃物中生物质资源利用的探讨 | 第165-168页 |
| ·工业废弃物中生物质资源利用的探讨 | 第168-171页 |
| ·小结 | 第171-172页 |
| 参考文献 | 第172-189页 |
| 全文总结 | 第189-191页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第191-192页 |
| 致谢 | 第192-193页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第193-194页 |
| 附录 | 第194-213页 |
