| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 一.双生病毒与伴随的小分子DNA | 第10-13页 |
| 1.双生病毒的基因组结构 | 第10-11页 |
| 2.双生病毒伴随的卫星DNAβ分子 | 第11页 |
| 3.双生病毒伴随的DNA1分子 | 第11-13页 |
| ·DNA1分子基因组结构 | 第11-12页 |
| ·DNA1分子生物学意义 | 第12-13页 |
| 二.植物病毒沉默载体 | 第13-20页 |
| 1.VIGS的原理 | 第13-15页 |
| 2.植物病毒沉默载体发展历程 | 第15-17页 |
| 3.病毒载体的优势 | 第17-18页 |
| 4.双生病毒沉默载体 | 第18-20页 |
| ·双生病毒沉默载体发展现状 | 第18-19页 |
| ·双生病毒沉默载体优势 | 第19-20页 |
| 5.病毒沉默载体应用前景 | 第20页 |
| 三.烟草花叶病毒与寄主互作相关研究 | 第20-24页 |
| 1.TMV的基因组结构 | 第20-21页 |
| 2.TMV复制相关的TOM类宿主因子 | 第21-22页 |
| 3 TMV胞间移动中与MP互作的寄主因子 | 第22页 |
| 4.TMV其它宿主因子 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-33页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·菌株和载体 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-33页 |
| ·RNA提取(TRIzol法) | 第24-25页 |
| ·RT-PCR | 第25-26页 |
| ·割胶回收 | 第26-27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·感受态细胞制备方法(CaCl_2制备法) | 第27页 |
| ·转化 | 第27-28页 |
| ·质粒提取 | 第28页 |
| ·酶切分析 | 第28-29页 |
| ·电击转化土壤根癌杆菌 | 第29页 |
| ·土壤根癌杆菌介导的注射接种 | 第29-30页 |
| ·土壤根癌杆菌介导的浸润接种 | 第30页 |
| ·CTAB法小量提取基因组DNA | 第30页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第30-31页 |
| ·Northern blot分析 | 第31-33页 |
| 第三章 本氏烟中TOM基因的克隆和功能初步分析 | 第33-42页 |
| ·材料与方法 | 第33-36页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第33页 |
| ·RT-PCR扩增TOM类寄主因子 | 第33-34页 |
| ·序列测定和分析 | 第34页 |
| ·构建沉默克隆 | 第34页 |
| ·接种供试植株 | 第34-35页 |
| ·TMV:GFP浸润攻毒 | 第35页 |
| ·GFP荧光检测与成像 | 第35-36页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第36页 |
| ·Northern blot分析 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-38页 |
| ·NbTOM1和NbTOM3的克隆及序列分析 | 第36-37页 |
| ·沉默NbTOM1与NbTOM3基因 | 第37页 |
| ·用TMV:GFP攻毒 | 第37页 |
| ·用半定量RT-PCR分析TOM类基因的mRNA水平 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-42页 |
| 第四章 番茄中TOM类基因的克隆和功能初步分析 | 第42-50页 |
| ·材料与方法 | 第42-45页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第42页 |
| ·设计简并引物及RT-PCR扩增目的片段 | 第42-43页 |
| ·序列测定和分析 | 第43页 |
| ·沉默载体构建 | 第43页 |
| ·接种供试植株 | 第43页 |
| ·TMV:GFP浸润攻毒 | 第43-44页 |
| ·GFP荧光检测与成像 | 第44页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第44页 |
| ·Northern blot分析 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-47页 |
| ·LeTH1,LeTH2和LeTH3的克隆及序列分析 | 第45页 |
| ·沉默番茄上TOM类基因 | 第45-46页 |
| ·用TMV:GFP攻毒 | 第46-47页 |
| ·用半定量RT-PCR分析TOM类基因的mRNA水平 | 第47页 |
| ·用Northern blot分析TMV复制水平 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 附录A:常用试剂及仪器 | 第57-59页 |
| 附录B:常用缓冲液及培养基配方 | 第59-62页 |
| 附录C:英文缩写词表 | 第62-63页 |
