| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-41页 |
| 第一节 柿树炭疽菌研究进展 | 第14-18页 |
| 1 柿树炭疽菌病害的危害性 | 第14-15页 |
| 2 炭疽菌侵染策略及与寄主互作的细胞学特征 | 第15-16页 |
| ·细胞内半活体营养侵染型(Intracellular Hemibiotrophic Infections) | 第15-16页 |
| ·角质层下内部侵染型(Subcuticular intramural Infections) | 第16页 |
| 3 胶孢炭疽菌中可能存在CLTA1的同源基因 | 第16-18页 |
| 第二节 真菌转录因子家族—锌指蛋白 | 第18-25页 |
| 1 锌指蛋白的分类 | 第18-19页 |
| 2 真菌锌簇蛋白 | 第19页 |
| 3.锌簇蛋白的结构和功能区域 | 第19-21页 |
| 4 锌簇蛋白的结合基元及与DNA结合的特异性 | 第21-22页 |
| 5 锌簇蛋白的角色 | 第22-23页 |
| 6 丝状真菌中的锌簇蛋白 | 第23-24页 |
| 7 锌簇蛋白的重要意义 | 第24-25页 |
| 第三节 真菌基因克隆及其功能分析 | 第25-40页 |
| 1 真菌基因克隆方法 | 第25-35页 |
| ·同源序列PCR扩增技术 | 第25-26页 |
| ·TAIL-PCR | 第26-29页 |
| ·TAIL-PCR技术的原理 | 第27-28页 |
| ·TAIL-PCR的优点以及不足 | 第28-29页 |
| ·RACE | 第29-32页 |
| ·RACE的基本原理 | 第29-31页 |
| ·RACE技术的优点和不足 | 第31-32页 |
| ·反向PCR(IPCR) | 第32-35页 |
| ·反向PCR技术的发展及应用 | 第33-34页 |
| ·影响反向PCR扩增的关键因素和条件 | 第34-35页 |
| 2 基因功能研究方法 | 第35-40页 |
| ·限制酶介导转化(REMI) | 第35-37页 |
| ·农秆菌介导的转化(ATMT) | 第37页 |
| ·目标基因断裂法 | 第37-40页 |
| 第四节 胶孢炭疽菌细胞学侵染和其转录激活因子(CGTA1)基因研究的目的和意义 | 第40-41页 |
| 第二章 柿树炭疽菌侵染柿树细胞学研究 | 第41-46页 |
| 1 材料和方法 | 第41-42页 |
| ·试验菌株和培养条件 | 第41页 |
| ·柿树栽培 | 第41-42页 |
| ·接种 | 第42页 |
| ·细胞学显微观察 | 第42页 |
| 2 结果 | 第42-45页 |
| ·组织发育对病害发生的影响 | 第42-43页 |
| ·侵染过程的细胞学观察结果 | 第43-45页 |
| 3.讨论 | 第45-46页 |
| ·柿树对炭疽病的抗性表现 | 第45页 |
| ·柿树炭疽菌侵染不同发育时期叶柄的细胞学 | 第45-46页 |
| 第三章 胶孢炭疽CGTA1基因的克隆 | 第46-78页 |
| 第一节 CGTA1基因片段的克隆 | 第46-63页 |
| 1 材料、设备和培养基 | 第46-48页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·试验设备 | 第46-47页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·培养基及抗生素 | 第47页 |
| ·抽提缓冲液的配制 | 第47-48页 |
| ·质粒抽提缓冲液的配制 | 第48页 |
| 2.方法 | 第48-55页 |
| ·简并引物设计 | 第48-49页 |
| ·CLTA1基因保守序列的确定 | 第48-49页 |
| ·设计目的基因简并引物 | 第49页 |
| ·菌株的培养及收集 | 第49页 |
| ·真菌基因的提取组 | 第49-50页 |
| ·基因片段的扩增 | 第50页 |
| ·目的片段的回收 | 第50-51页 |
| ·目的片段与pMD-18T载体的连接 | 第51-52页 |
| ·重组质粒转化 | 第52-53页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第52页 |
| ·转化 | 第52-53页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组质粒的筛选选—蓝/白斑筛选 | 第53页 |
| ·质粒抽提 | 第53-54页 |
| ·菌落PCR | 第54页 |
| ·序列分析软件及网站 | 第54-55页 |
| 3.结果与分析 | 第55-61页 |
| ·扩增CLTA1基因片段简并引物设计 | 第55-57页 |
| ·CLTA1基因的结构特征 | 第55-56页 |
| ·CLTA1基因同源性分析及简并引物 | 第56-57页 |
| ·CGTA1基因片段的克隆 | 第57-59页 |
| ·CGTA1基因的片段的扩增 | 第57-58页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·PCR产物的测序结果及序列分析 | 第59-61页 |
| ·序列测定结果 | 第59页 |
| ·CGTA1基因片段和CLTA1基因序列的比对分析 | 第59-60页 |
| ·CGTA1基因片段同源性分析 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第二节 CGTA1基因片段侧翼序列的克隆 | 第63-78页 |
| 1 材料与方法 | 第63-65页 |
| ·试剂和材料 | 第63页 |
| ·实验仪器 | 第63页 |
| ·菌丝培养及基因组DNA的提取 | 第63页 |
| ·TAIL-PCR引物的设计、反应体系和反应程序 | 第63-65页 |
| ·TAIL-PCR扩增片段的连接转化 | 第65页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第65页 |
| ·目的片段的序列测定及序列分析 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-75页 |
| ·侧翼序列的扩增 | 第65-73页 |
| ·687 bp片段3'端侧翼序列的扩增 | 第65-68页 |
| ·687 bp片段5'端侧翼序列的扩增 | 第68-70页 |
| ·1134 bp片段3'端侧翼序列扩增 | 第70-73页 |
| ·基因片段比较、编辑和序列分析 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-78页 |
| 参考文献 | 第78-89页 |
