| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-41页 |
| ·烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD(H)性质及作用 | 第12-19页 |
| ·NAD(H)的理化性质 | 第12-13页 |
| ·细胞中NAD~+/NADH的含量和状态 | 第13-14页 |
| ·NAD(H)的生物合成途径 | 第14-15页 |
| ·NAD(H)的生理作用 | 第15-19页 |
| ·常用的NAD(H)分子检测方法 | 第19-26页 |
| ·紫外分光光度法 | 第19页 |
| ·电泳法 | 第19-20页 |
| ·色谱法 | 第20-21页 |
| ·酶法分析 | 第21-22页 |
| ·质谱法 | 第22-23页 |
| ·电化学法 | 第23-24页 |
| ·荧光成像 | 第24-25页 |
| ·构建新型NADH探针意义 | 第25-26页 |
| ·荧光蛋白的性质及应用 | 第26-39页 |
| ·荧光蛋白的研究进展 | 第26-28页 |
| ·绿色荧光蛋白的结构 | 第28-32页 |
| ·荧光蛋白的应用 | 第32-39页 |
| ·展望 | 第39-41页 |
| 第2章 Perex重组质粒的构建及鉴定 | 第41-61页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·菌株与质粒 | 第41页 |
| ·酶和试剂 | 第41页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第41-42页 |
| ·试剂配置 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-51页 |
| ·实验流程 | 第43页 |
| ·Bacillus subtilis 168基因组提取 | 第43-44页 |
| ·目的基因亚克隆 | 第44-46页 |
| ·重组质粒的构建 | 第46-50页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-58页 |
| ·目的基因ydiH及荧光蛋白基因YFP的扩增结果 | 第51页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第51-52页 |
| ·SOE PCR扩增结果 | 第52页 |
| ·SOE PCR产物回收与纯化 | 第52页 |
| ·目的片段亚克隆结果 | 第52-54页 |
| ·完整的原核表达质粒构建结果 | 第54-55页 |
| ·构建探针系列 | 第55-58页 |
| ·分析与讨论 | 第58-61页 |
| ·实验原理 | 第58页 |
| ·重组质粒构建方案选择 | 第58-59页 |
| ·构建方案的优化 | 第59页 |
| ·筛选方案的选择 | 第59-61页 |
| 第3章 Perex蛋白的表达、纯化及性质的初步研究 | 第61-83页 |
| ·材料 | 第61-64页 |
| ·菌株及质粒 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第61-62页 |
| ·试剂配置 | 第62-64页 |
| ·实验方法 | 第64-69页 |
| ·实验流程 | 第64-65页 |
| ·不同表达条件评估 | 第65-66页 |
| ·目的基因的表达 | 第66-67页 |
| ·表达产物的获取 | 第67页 |
| ·表达产物的纯化 | 第67-69页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第69页 |
| ·表达产物的性质测定 | 第69页 |
| ·实验结果 | 第69-76页 |
| ·表达条件评估 | 第69-71页 |
| ·表达产物获取 | 第71页 |
| ·纯化方法建立 | 第71-73页 |
| ·蛋白表达、纯化 | 第73-74页 |
| ·探针光谱性质测定 | 第74-75页 |
| ·探针结合性质测定 | 第75-76页 |
| ·分析与讨论 | 第76-83页 |
| ·实验原理 | 第76-78页 |
| ·表达菌株的选择 | 第78页 |
| ·不同表达条件的确定 | 第78页 |
| ·蛋白纯化方法的建立 | 第78-79页 |
| ·利用工具软件预测分析蛋白相关性质 | 第79-80页 |
| ·探针性质的分析 | 第80-83页 |
| 第4章 Perex蛋白的突变体构建及鉴定 | 第83-96页 |
| ·材料 | 第83-85页 |
| ·菌株及质粒 | 第83页 |
| ·酶和试剂 | 第83页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第83页 |
| ·试剂配置 | 第83-85页 |
| ·实验方法 | 第85-88页 |
| ·实验流程 | 第85-86页 |
| ·突变文库建立 | 第86-88页 |
| ·突变系列质粒双酶切 | 第88页 |
| ·突变体质粒鉴定 | 第88页 |
| ·实验结果 | 第88-92页 |
| ·定点突变PCR扩增结果 | 第88-90页 |
| ·双酶切结果 | 第90-91页 |
| ·转化结果 | 第91-92页 |
| ·突变体质粒鉴定结果 | 第92页 |
| ·分析与讨论 | 第92-96页 |
| ·实验原理 | 第92-93页 |
| ·突变构建 | 第93-95页 |
| ·筛选鉴定方法选择 | 第95-96页 |
| 第5章 Perex蛋白突变体的高通量筛选及性质的初步研究 | 第96-118页 |
| ·材料 | 第96-100页 |
| ·菌株和质粒 | 第96-97页 |
| ·试剂 | 第97页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第97-98页 |
| ·试剂配置 | 第98-100页 |
| ·实验方法 | 第100-103页 |
| ·实验流程 | 第100页 |
| ·目的基因的表达 | 第100页 |
| ·表达产物的获取 | 第100-101页 |
| ·表达产物的纯化 | 第101-102页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第102页 |
| ·表达产物的性质测定 | 第102页 |
| ·表达产物的高通量筛选 | 第102-103页 |
| ·实验结果 | 第103-114页 |
| ·高通量蛋白纯化结果 | 第103-104页 |
| ·高通量筛选结果 | 第104-107页 |
| ·不同的核苷酸对探针影响 | 第107-111页 |
| ·不同pH下结合曲线 | 第111-112页 |
| ·结合-响应时间曲线 | 第112-114页 |
| ·分析与讨论 | 第114-118页 |
| ·实验原理 | 第114页 |
| ·高通量筛选结果 | 第114-115页 |
| ·不同的核苷酸对探针影响 | 第115-116页 |
| ·pH对探针结合性质影响 | 第116-117页 |
| ·探针的结合-响应时间 | 第117页 |
| ·最优化探针 | 第117-118页 |
| 第6章 结论 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-132页 |
| 致谢 | 第132页 |
