| 摘要 | 第1-20页 |
| Abstract | 第20-22页 |
| 第一章 前言 | 第22-54页 |
| 1 基因治疗 | 第22-26页 |
| ·基因治疗机理 | 第22页 |
| ·基因治疗途径及步骤 | 第22-23页 |
| ·基因治疗的原则 | 第23-25页 |
| ·基因治疗中有待解决的关键问题 | 第25-26页 |
| 2 基因载体 | 第26-35页 |
| ·病毒载体 | 第28-32页 |
| ·非病毒载体 | 第32-35页 |
| 3 阳离子聚合物基因载体 | 第35-40页 |
| ·阳离子聚合物主要类型 | 第36-38页 |
| ·阳离子聚合物的基因传递机制 | 第38-40页 |
| ·阳离子聚合物载体的毒性 | 第40页 |
| 4 RNAi技术 | 第40-44页 |
| ·RNAi的发现 | 第40-41页 |
| ·RNAi机制 | 第41-42页 |
| ·RNAi技术的优越性 | 第42-43页 |
| ·RNAi在基因治疗领域的应用 | 第43-44页 |
| 5 抗体制备技术 | 第44-52页 |
| ·抗体的发展 | 第45-49页 |
| ·单克隆抗体在医学中的应用 | 第49-51页 |
| ·单克隆抗体与多克隆抗体的比较 | 第51-52页 |
| 6 本论文的研究内容 | 第52-54页 |
| 第二章 环氧合酶COX-2抗体制备 | 第54-79页 |
| 一、材料 | 第54-60页 |
| 1 常用试剂和耗材 | 第54-58页 |
| 2 主要设备 | 第58-59页 |
| 3 生物材料 | 第59-60页 |
| 二、试验方法 | 第60-71页 |
| 1 环氧合酶COX-2多克隆抗体制备 | 第60-64页 |
| ·兔抗血清的制备 | 第60页 |
| ·DOT-ELISA测效价试验 | 第60-61页 |
| ·抗体特异性的鉴定 | 第61页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第61-63页 |
| ·辣根过氧化物酶(HRP)标记多克隆抗体(过碘酸钠法) | 第63-64页 |
| 2 环氧合酶COX-2单克隆抗体制备 | 第64-71页 |
| ·免疫方案 | 第64页 |
| ·免疫脾淋巴细胞制备 | 第64页 |
| ·髓瘤细胞的准备 | 第64-65页 |
| ·饲养细胞(Feeder cells)的制备 | 第65-66页 |
| ·细胞融合 | 第66-67页 |
| ·HAT选择杂交瘤 | 第67页 |
| ·ELISA方法筛选杂交瘤细胞分泌抗体 | 第67页 |
| ·杂交瘤的克隆化(有限稀释法) | 第67-68页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第68-69页 |
| ·杂交瘤细胞复苏 | 第69页 |
| ·单克隆抗体的大量生产 | 第69页 |
| ·单抗的纯化 | 第69-70页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第70-71页 |
| 三、结果 | 第71-75页 |
| 1 环氧合酶COX-2多克隆抗体制备 | 第71-73页 |
| ·多克隆抗体的效价鉴定 | 第71-72页 |
| ·抗体的特异性鉴定 | 第72-73页 |
| 2 环氧合酶COX-2单克隆抗体制备 | 第73-75页 |
| ·抗体特异性的鉴定 | 第73-74页 |
| ·McAb的Ig类的鉴定 | 第74-75页 |
| ·McAb效价的确定 | 第75页 |
| ·单抗纯度的鉴定 | 第75页 |
| 四、讨论 | 第75-79页 |
| 1 COX多克隆抗体制备 | 第75-76页 |
| 2 COX单克隆抗体制备 | 第76-79页 |
| 第三章 阳离子聚合物基因传递载体的应用基础研究 | 第79-143页 |
| 一、材料 | 第79-82页 |
| 1 常用试剂 | 第79页 |
| 2 主要设备 | 第79-81页 |
| 3 生物材料 | 第81-82页 |
| 二、试验方法 | 第82-94页 |
| 1 阳离子聚合物基因传递载体构建 | 第82-83页 |
| ·阳离子聚合物合成 | 第82页 |
| ·基因载体工作液的制备 | 第82页 |
| ·制备阳离子聚合物基因传递载体 | 第82-83页 |
| 2 sofast基因载体体外试验研究 | 第83-90页 |
| ·sofast/DNA复合物形成、粒径及zeta电位分析 | 第83页 |
| ·sofast/DNA复合物抗核酸酶能力 | 第83页 |
| ·sofast基因载体缓冲能力 | 第83-84页 |
| ·sofast基因载体结合核酸能力(DNA延滞试验) | 第84页 |
| ·sofast基因载体所介导的基因转染效果研究(体外应用) | 第84-86页 |
| ·sofast基因载体细胞毒性分析 | 第86页 |
| ·sofast基因载体的抗血清特性 | 第86-87页 |
| ·不同细胞株类型的转染操作及优化 | 第87-88页 |
| ·转染分析时间 | 第88页 |
| ·基因融合肽对sofast基因载体转染的促进作用 | 第88-90页 |
| ·sofast基因载体稳定性试验 | 第90页 |
| ·基因载体工作液盐浓度对转染效率的影响(体外) | 第90页 |
| 3 sofast基因载体体内试验 | 第90-93页 |
| ·sofast基因载体体内毒性试验 | 第90-92页 |
| ·绿色荧光蛋白基因在大鼠肺肝肾细胞中的表达(体内应用) | 第92-93页 |
| ·体内使用时候sofast基因载体与DNA比例的优化 | 第93页 |
| ·基因载体工作液盐浓度对转染效率的影响(体内) | 第93页 |
| 4 sofast基因载体转染siRNA效果研究 | 第93-94页 |
| 三、结果 | 第94-120页 |
| 1 sofast阳离子聚合物基因传递载体构建 | 第94-95页 |
| 2 sofast基因载体体外试验研究 | 第95-114页 |
| ·sofast/DNA复合物形成、粒径及zeta电位分析 | 第95-97页 |
| ·sofast/DNA复合物抗核酸酶能力 | 第97-98页 |
| ·sofast基因载体的缓冲能力 | 第98-99页 |
| ·sofast基因载体结合核酸能力的研究(DNA延滞试验) | 第99-100页 |
| ·sofast基因载体所介导的基因转染效果研究(体外试验) | 第100-104页 |
| ·sofast基因载体细胞毒性分析 | 第104-105页 |
| ·sofast基因载体的抗血清特性分析 | 第105-106页 |
| ·不同细胞株类型的转染操作及优化 | 第106-109页 |
| ·转染分析的时间 | 第109-111页 |
| ·diINF-7对sofast基因载体转染效果的影响 | 第111-113页 |
| ·sofast基因载体稳定性试验 | 第113页 |
| ·基因载体工作液盐浓度对转染效率的影响(体外应用) | 第113-114页 |
| 3 sofast基因载体体内试验 | 第114-119页 |
| ·sofast基因载体体内毒性试验 | 第114-115页 |
| ·绿色荧光蛋白基因在大鼠肝肾细胞中的表达(体内) | 第115-118页 |
| ·体内使用时候sofast基因载体与DNA比例的优化 | 第118-119页 |
| ·基因载体工作液盐浓度对转染效率的影响(体内应用) | 第119页 |
| 4 sofast基因载体转染siRNA的效果研究 | 第119-120页 |
| 四、讨论 | 第120-139页 |
| 1 sofast基因载体介导的转染机制 | 第120-123页 |
| 2 sofast/DNA物理特性 | 第123-124页 |
| 3 sofast基因载体抗核酸酶作用 | 第124页 |
| 4 sofast基因载体转染效果 | 第124-125页 |
| 5 sofast基因载体毒性 | 第125-126页 |
| 6 sofast抗血清特性 | 第126-127页 |
| 7 影响转染效率的因素、优化 | 第127-130页 |
| 8 转染分析时间 | 第130-131页 |
| 9 diINF-7对sofast基因载体转染效果的促进作用 | 第131-133页 |
| 10 sofast基因载体体内毒性试验 | 第133页 |
| 11 sofast基因载体体内应用 | 第133-138页 |
| 12 sofast介导的siRNA转染 | 第138-139页 |
| 五、小结 | 第139-143页 |
| 第四章 脂质—阳离子聚合物siRNA基因载体的应用基础研究 | 第143-187页 |
| 一、材料 | 第143-147页 |
| 1 常用试剂 | 第143-144页 |
| 2 主要设备 | 第144-146页 |
| 3 生物材料 | 第146-147页 |
| 二、试验方法 | 第147-158页 |
| 1 脂质—阳离子聚合物siRNA基因载体构建 | 第147-148页 |
| ·脂质—阳离子聚合物合成 | 第147页 |
| ·基因载体工作液的制备 | 第147-148页 |
| ·制备脂质—阳离子聚合物基因传递载体 | 第148页 |
| 2 lipid-cationic polymer基因载体体外试验 | 第148-154页 |
| ·lipid-cationic polymer/siRNA复合物形成、粒径及zeta电位分析 | 第148页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体结合核酸能力的研究(DNA延滞试验) | 第148-149页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体缓冲能力 | 第149页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体所介导的基因转染效果研究(体外应用) | 第149-150页 |
| ·lipid-cationic polymer/siRNA复合物抗核酸酶能力 | 第150页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体细胞毒性分析验证 | 第150-151页 |
| ·siRNA作用特异性的研究 | 第151页 |
| ·降解试验 | 第151页 |
| ·稳定性试验 | 第151页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体的抗血清特性 | 第151-152页 |
| ·基因融合肽diINF-7对lipid-cationic polymer转染效果的影响 | 第152-153页 |
| ·质子泵抑制剂对lipid-cationic polymer转染效果的影响 | 第153-154页 |
| 3 lipid-cationic polymer基因载体体内试验 | 第154-158页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体体内毒性试验 | 第154-155页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体体内转染效果 | 第155-158页 |
| 三、结果 | 第158-177页 |
| 1 脂质—阳离子聚合物siRNA基因传递载体构建 | 第158-159页 |
| 2 lipid-cationic polymer基因载体体外试验 | 第159-172页 |
| ·lipid-cationic polymer/DNA复合物形成、粒径及zeta电位分析 | 第159-161页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体结合核酸能力的研究(DNA延滞试验) | 第161-162页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体缓冲能力 | 第162-163页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体所介导的基因转染效果研究(体外应用) | 第163-165页 |
| ·lipid-cationic polymer/siRNA复合物抗核酸酶能力 | 第165页 |
| ·lipid-cationic polymer siRNA基因载体细胞毒性分析验证 | 第165-166页 |
| ·siRNA作用特异性的研究 | 第166-167页 |
| ·降解试验 | 第167-168页 |
| ·稳定性试验 | 第168页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体的抗血清特性 | 第168-169页 |
| ·diINF-7对转染效果的影响 | 第169-171页 |
| ·质子泵抑制剂对lipid-cationic polymer转染效果的影响 | 第171-172页 |
| 3 lipid-cationic polymer基因载体体内试验 | 第172-177页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体体内毒性试验 | 第172-173页 |
| ·lipid-cationic polymer基因载体体内转染效果 | 第173-177页 |
| 四、讨论 | 第177-184页 |
| 1 脂质—阳离子聚合物转染siRNA机制的探讨 | 第177-179页 |
| 2 pH缓冲能力、抗核酸酶作用 | 第179-180页 |
| 3 lipid-cationic polymer/siRNA复合物物理特性 | 第180页 |
| 4 转染特性 | 第180-182页 |
| 5 lipid-cationic polymer体内转染 | 第182-184页 |
| 五、小结 | 第184-187页 |
| 第五章 肿瘤患者IgM/IgG类免疫复合物的免疫调节作用 | 第187-208页 |
| 一、引言 | 第187-190页 |
| 二、材料和方法 | 第190-192页 |
| 1.实验材料 | 第190页 |
| 2 研究对象 | 第190-192页 |
| 3.主要仪器 | 第192页 |
| 二、方法 | 第192-194页 |
| 1 Ig/Ig-TCIC测定 | 第192-193页 |
| 2 血清总、游离和复合Ig的测定 | 第193-194页 |
| 3 统计学检验 | 第194页 |
| 三、结果 | 第194-206页 |
| 1 肿瘤患者总IgM和IgG水平 | 第194-197页 |
| 2 肿瘤患者复合IgM和IgG水平 | 第197-200页 |
| 3 肿瘤患者IgM/IgG-TCIC水平 | 第200-203页 |
| 4 肿瘤患者IgG/IgM-TCIC水平 | 第203-206页 |
| 四、讨论 | 第206-208页 |
| 参考文献 | 第208-229页 |
| 致谢 | 第229-230页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第230-231页 |
| 攻读博士期间申报的国家发明专利 | 第231页 |
