| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-31页 |
| ·轮状病毒概述 | 第14-25页 |
| ·轮状病毒形态结构 | 第14-15页 |
| ·轮状病毒分类 | 第15-16页 |
| ·RV 的理化特性 | 第16-17页 |
| ·RV 基因组结构特征 | 第17-18页 |
| ·RV 蛋白及其作用 | 第18-21页 |
| ·RV 的培养特性 | 第21页 |
| ·发病机理 | 第21-22页 |
| ·防治与疫苗 | 第22-23页 |
| ·RV 诊断技术 | 第23-25页 |
| ·胶体金技术在免疫学检测中的应用 | 第25-29页 |
| ·胶体金技术在免疫学中的应用 | 第25-28页 |
| ·胶体金技术的优缺点 | 第28-29页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第29页 |
| ·主要研究内容 | 第29-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-50页 |
| ·材料 | 第31-36页 |
| ·病毒与细胞 | 第31页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·阳性血清 | 第31页 |
| ·免疫层析材料 | 第31页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第31-36页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-50页 |
| ·病毒纯化 | 第36-37页 |
| ·病毒的鉴定 | 第37页 |
| ·小鼠免疫 | 第37页 |
| ·间接ELISA 检测方法反应条件的确定 | 第37-38页 |
| ·细胞融合 | 第38页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株筛选及克隆 | 第38-39页 |
| ·单克隆抗体细胞株的冻存、复苏及稳定性试验 | 第39页 |
| ·单克隆抗体腹水的生产及预处理 | 第39页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第39-41页 |
| ·单克隆抗体免疫球蛋白类—亚类—型鉴定 | 第41页 |
| ·杂交瘤细胞染色体分析 | 第41页 |
| ·单克隆抗体对应抗原表位分析 | 第41-42页 |
| ·单克隆抗体的纯化与鉴定 | 第42页 |
| ·胶体金颗粒的制备 | 第42-44页 |
| ·胶体金标记抗体 | 第44-46页 |
| ·金标垫的制备 | 第46页 |
| ·印膜 | 第46-47页 |
| ·样品垫处理液的选择 | 第47-48页 |
| ·样品处理液的选择 | 第48页 |
| ·试纸条的组装 | 第48页 |
| ·试纸条的检测方法和结果判定 | 第48-49页 |
| ·特异性试验 | 第49页 |
| ·灵敏性试验 | 第49页 |
| ·重复性试验 | 第49页 |
| ·稳定性试验 | 第49页 |
| ·现地试验 | 第49-50页 |
| 3 实验结果 | 第50-66页 |
| ·病毒纯化后的鉴定 | 第50页 |
| ·间接ELISA 反应条件的确定 | 第50-51页 |
| ·饲养细胞的制备结果 | 第51页 |
| ·骨髓瘤细胞的制备结果 | 第51-52页 |
| ·细胞融合与筛选 | 第52-53页 |
| ·杂交瘤细胞培养上清及腹水单抗效价的测定 | 第53页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性试验 | 第53-54页 |
| ·单克隆抗体的特异性分析 | 第54-56页 |
| ·PoRV 抗原捕获ELISA 试验分析 | 第54-55页 |
| ·IFA 检测8 株单抗与PoRV 的反应性 | 第55-56页 |
| ·Western-blot 分析 | 第56页 |
| ·单克隆抗体免疫球蛋白类—亚类—型鉴定 | 第56-57页 |
| ·杂交瘤细胞染色体分析 | 第57-58页 |
| ·腹水单抗饱和值测定 | 第58页 |
| ·单克隆抗体对应的抗原表位分析 | 第58页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第58-59页 |
| ·胶体金的制备及粒径选择 | 第59页 |
| ·胶体金标记抗体 | 第59-60页 |
| ·胶体金标记抗体最适稳定量的测定结果 | 第59-60页 |
| ·胶体金标记抗体最适pH 的测定 | 第60页 |
| ·金标垫的制备 | 第60-61页 |
| ·金标单抗浓度的确定 | 第60-61页 |
| ·金标垫处理液的选择 | 第61页 |
| ·印膜 | 第61-62页 |
| ·硝酸纤维素膜的选择 | 第61页 |
| ·单克隆抗体1D11 及羊抗鼠IgG 二抗包被浓度确定 | 第61-62页 |
| ·包被液的选择 | 第62页 |
| ·封闭液的选择 | 第62页 |
| ·样品垫处理液的选择 | 第62页 |
| ·样品处理液的选择 | 第62页 |
| ·试纸条的组装及结果判定 | 第62-63页 |
| ·试纸条的敏感性及特异性试验 | 第63页 |
| ·试纸条重复性试验 | 第63-64页 |
| ·试纸条稳定性试验 | 第64页 |
| ·现地试验 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-75页 |
| ·轮状病毒感染流行特点及实验动物标准化 | 第66页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第66-69页 |
| ·病毒纯化 | 第66-67页 |
| ·免疫方法的选择 | 第67页 |
| ·细胞融合 | 第67-68页 |
| ·间接ELISA 方法的建立 | 第68页 |
| ·单克隆抗体的特性鉴定及初步应用 | 第68-69页 |
| ·胶体金免疫层析诊断方法的建立 | 第69-70页 |
| ·胶体金性质 | 第70-71页 |
| ·抗体的纯化 | 第71页 |
| ·蛋白质与胶体金的吸附 | 第71-72页 |
| ·胶体金免疫层析试纸条的敏感性 | 第72页 |
| ·胶体金标记抗体的浓度 | 第72页 |
| ·膜对蛋白的吸附量 | 第72页 |
| ·免疫层析材料的选择 | 第72页 |
| ·胶体金免疫层析试纸条的特异性 | 第72-73页 |
| ·胶体金粒径的选择 | 第73页 |
| ·点样环境 | 第73页 |
| ·试纸条的组装及保存 | 第73页 |
| ·试纸条的检测效果及存在问题 | 第73-75页 |
| 5 结论 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 附录 | 第86-87页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第87页 |