| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 英文缩略词一览表 | 第9-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-24页 |
| ·淋巴增强因子-1(LEF-1)与肿瘤进程研究进展 | 第11-19页 |
| ·LEF/TCF家族简介 | 第11页 |
| ·LEF-1基因、蛋白结构特点 | 第11-14页 |
| ·LEF-1与Wnt信号通路的关系 | 第14-15页 |
| ·Wnt信号通路与人类疾病及肿瘤的关系 | 第15-17页 |
| ·LEF-1与肿瘤相关性研究进展 | 第17-19页 |
| ·RNA干扰技术(RNAi) | 第19-24页 |
| ·RNA干扰研究进展 | 第19-20页 |
| ·RNA干扰机制 | 第20-21页 |
| ·RNA干扰工作机制的特点 | 第21页 |
| ·质粒载体介导的RNA干扰的应用前景 | 第21-24页 |
| 第2章 本课题的研究内容与意义、技术路线及创新之处 | 第24-26页 |
| 第3章 LEF-1-shRNA真核表达载体的构建和鉴定及其对LEF-1基因沉默效应的分析 | 第26-44页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·重组质粒及细胞株 | 第26页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第26-28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28-31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·shRNA靶点序列设计、合成及shRNA表达质粒载体的构建 | 第31页 |
| ·LEF1-shRNA质粒表达载体的构建与鉴定 | 第31页 |
| ·质粒载体的制备与鉴定 | 第31-32页 |
| ·细胞培养 | 第32-33页 |
| ·细胞转染与效率评估 | 第33-34页 |
| ·Western blots检测LEF-1基因沉默后蛋白的表达水平 | 第34-37页 |
| ·统计学处理 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-42页 |
| ·LEF1-shRNA质粒表达载体的构建与鉴定 | 第37-39页 |
| ·S-TranG转染试剂转染条件的优化 | 第39-40页 |
| ·LEF-1 RNAi质粒转染效率评估 | 第40-41页 |
| ·Western blots检测LEF-1蛋白表达水平 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第4章 LEF-1基因沉默对人结直肠癌细胞生物学行为的影响 | 第44-52页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·质粒及细胞株 | 第44页 |
| ·主要实验仪器及试剂 | 第44-45页 |
| ·主要试剂的配制 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·细胞培养与质粒载体的制备(同第3章) | 第45页 |
| ·实验分组与细胞转染 | 第45页 |
| ·体外损伤修复法 | 第45-46页 |
| ·细胞增殖能力检测 | 第46页 |
| ·细胞凋亡检测(Hoechst33258染色) | 第46-47页 |
| ·统计学处理 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-50页 |
| ·LEF1-shRNA对Caco-2细胞运动能力的影响 | 第47-48页 |
| ·LEF1-shRNA对caco-2细胞增殖能力的影响 | 第48-49页 |
| ·LEF1-shRNA对Caco-2细胞凋亡的影响 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间的科研成果 | 第63页 |
