| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-34页 |
| ·阿尔茨海默氏症 | 第14-17页 |
| ·阿尔茨海默氏症概述 | 第14页 |
| ·阿尔茨海默病的发病机制和β-淀粉蛋白的形成 | 第14-17页 |
| ·Nicastrin的研究进展 | 第17-23页 |
| ·Nicastrin 的分子结构特点 | 第17-19页 |
| ·Nicastrin 与γ-分泌酶 | 第19-20页 |
| ·Nicastrin 与γ-分泌酶其他组分的相互作用 | 第20-21页 |
| ·Nicastrin 的功能 | 第21-23页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第23-34页 |
| ·酵母双杂交系统的作用原理 | 第24-26页 |
| ·酵母双杂交系统选用酵母作为报告菌株的优点 | 第26页 |
| ·酵母双杂交系统相对于其它方法具有的优点 | 第26-27页 |
| ·酵母双杂交系统的发展 | 第27页 |
| ·基于酵母双杂交系统的其它杂交系统 | 第27-30页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第30-32页 |
| ·本课题的主要目的和技术路线 | 第32-34页 |
| 第二章 Nicastrin 相互作用蛋白的筛选 | 第34-60页 |
| ·实验材料 | 第34-40页 |
| ·主要材料与试剂 | 第34-39页 |
| ·主要仪器与设备 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-48页 |
| ·PCR 扩增 NCT 蛋白胞内端 | 第40-41页 |
| ·PGBKT7-NCT 重组诱饵质粒的构建 | 第41页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第41页 |
| ·大肠杆菌质粒的小量提取 | 第41-42页 |
| ·酵母转化 | 第42-43页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性滤膜影印分析法 | 第43页 |
| ·诱饵质粒在 AH109 中表达的鉴定 | 第43-44页 |
| ·人脑cDNA 文库的滴度测定、扩增和质量鉴定 | 第44-45页 |
| ·酵母宿主细胞 AH109 的表型验证 | 第45页 |
| ·cDNA 文库的转化和营养缺陷筛选 | 第45页 |
| ·酵母质粒 DNA 的提取 | 第45-46页 |
| ·酵母质粒 DNA 转化大肠杆菌 | 第46-47页 |
| ·重转化排除假阳性 | 第47页 |
| ·DNA 序列分析 | 第47页 |
| ·液体β－半乳糖苷酶活性测试 | 第47-48页 |
| ·实验结果 | 第48-59页 |
| ·NCT cDNA 的 PCR 结果 | 第48-49页 |
| ·重组质粒pGBKT7-NCT 的鉴定 | 第49页 |
| ·pGBKT7-NCT 转入AH109 | 第49-52页 |
| ·诱饵质粒自激活测试结果 | 第52页 |
| ·诱饵质粒表达的检测 | 第52-53页 |
| ·酵母细胞 AH109 的表型验证 | 第53页 |
| ·人胎脑 cDNA 文库的滴度测定、扩增和质量鉴定 | 第53-54页 |
| ·文库的初步筛选 | 第54页 |
| ·再次共转化及重新确认结果 | 第54-55页 |
| ·测序结果及分析 | 第55-57页 |
| ·β－半乳糖苷酶活性测试结果 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 第三章 免疫共沉淀验证蛋白的相互作用 | 第60-74页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·菌株和细胞 | 第60页 |
| ·质粒 | 第60页 |
| ·培养基 | 第60-61页 |
| ·细胞培养所需试剂 | 第61页 |
| ·细胞转染所需试剂 | 第61页 |
| ·细胞裂解液 TNE | 第61页 |
| ·抗体 | 第61页 |
| ·蛋白酶抑制剂 | 第61页 |
| ·其他所需试剂 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-66页 |
| ·表达全长 NCT 质粒的构建 | 第61-62页 |
| ·构建pCMV-myc-MT2A | 第62-63页 |
| ·构建pCMV5-HA-THAP7 | 第63页 |
| ·重叠延伸法进行THAP7 cDNA 的特异位点诱变 | 第63页 |
| ·质粒的大量纯化 | 第63-65页 |
| ·细胞培养与传代 | 第65页 |
| ·瞬时转染 | 第65页 |
| ·细胞裂解与蛋白收取 | 第65页 |
| ·免疫共沉淀 | 第65-66页 |
| ·免疫印迹分析 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-70页 |
| ·表达全长NCT 质粒的构建 | 第66-67页 |
| ·构建pCMV-myc-MT2A | 第67页 |
| ·重组质粒进行测序鉴定 | 第67-68页 |
| ·重叠延伸法进行THAP7 cDNA 的特异位点诱变 | 第68-69页 |
| ·在293T 细胞中验证蛋白间的相互作用 | 第69-70页 |
| ·讨论与总结 | 第70-74页 |
| ·MT2A 蛋白与 NCT 的相互作用 | 第70-71页 |
| ·THAP7 蛋白与NCT 的相互作用 | 第71-73页 |
| ·结论和展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
