| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-21页 |
| ·RNA 依赖的 RNA 聚合酶的分类、命名及结构 | 第14页 |
| ·RDR 的分离鉴定 | 第14-15页 |
| ·RDR 的基因表达调控 | 第15-16页 |
| ·RDR 的生物学功能 | 第16-19页 |
| ·植物RNA 沉默 | 第16页 |
| ·参与RNA 沉默的细胞组分 | 第16-17页 |
| ·RDR 在PTGS 和VIGS 中的作用 | 第17-18页 |
| ·RDR 与植物抗病防御 | 第18-19页 |
| ·RDR 与DNA 甲基化 | 第19页 |
| ·RDR 参与生长发育 | 第19页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-40页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第21页 |
| ·菌株与质粒 | 第21-23页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第23页 |
| ·PCR 引物 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-40页 |
| ·植物总RNA 的提取及检测 | 第23-25页 |
| ·利用RNeasy Plant Mini Kit 提取总RNA | 第23-24页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第24页 |
| ·甲醛变性凝胶进行RNA 电泳 | 第24-25页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第25页 |
| ·cDNA 回收纯化 | 第25-26页 |
| ·cDNA 的5′加尾反应 | 第26页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第26-29页 |
| ·GhRDR6 中间片段的获得 | 第26-27页 |
| ·RACE 法获得5′端序列 | 第27-28页 |
| ·RACE 法获得3′端序列 | 第28-29页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第29页 |
| ·电泳目的片段的回收 | 第29-30页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第31页 |
| ·试剂盒质粒微量提取方案 | 第31-32页 |
| ·对重组质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·GhRDR6 全长基因组序列的获得 | 第32-34页 |
| ·CTAB 法提取棉花基因组总DNA | 第32-33页 |
| ·总DNA 提取产物的纯化 | 第33-34页 |
| ·Southern blot 和Northern blot | 第34-35页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第34页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第34页 |
| ·转膜及烘膜 | 第34-35页 |
| ·探针合成 | 第35页 |
| ·预杂交及杂交 | 第35页 |
| ·半定量RT-PCR 分析 | 第35-36页 |
| ·总RNA 的提取 | 第36页 |
| ·琼脂糖甲醛变性胶电泳 | 第36页 |
| ·反转录cDNA 第一条链的合成 | 第36页 |
| ·半定量RT-PCR 检测 | 第36-37页 |
| ·植物表达载体的构建与转化 | 第37-39页 |
| ·植物正义表达载体的构建 | 第37页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第38页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第38-39页 |
| ·转基因植株的培养与处理 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-55页 |
| ·棉花RNA 依赖的RNA 聚合酶6 基因的分离 | 第40-42页 |
| ·总RNA 的提取及反转录 | 第40页 |
| ·GhRDR6 中间片段的分离 | 第40-41页 |
| ·GhRDR6 3′和5′片段的分离 | 第41-42页 |
| ·GhRDR6 全长cDNA 的分离 | 第42页 |
| ·GhRDR6 的序列分析 | 第42-45页 |
| ·GhRDR6 的全长cDNA 分析 | 第42页 |
| ·GhRDR6 编码的蛋白质序列分析 | 第42-45页 |
| ·GhRDR6 基因组序列的克隆及Southern blot | 第45页 |
| ·GhRDR6 基因的组织特异性分析 | 第45-46页 |
| ·GhRDR6 基因在多种环境胁迫下的表达模式 | 第46页 |
| ·GhRDR6 基因在多种信号分子和植物激素诱导下的表达模式 | 第46-47页 |
| ·GhRDR6 转基因植株的获得 | 第47-50页 |
| ·表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·转基因植株的获得 | 第48页 |
| ·T0 代转基因植株的鉴定 | 第48-49页 |
| ·T1 代转基因植株的鉴定 | 第49-50页 |
| ·T2 代转基因植株的鉴定 | 第50页 |
| ·转基因植株的功能分析 | 第50-55页 |
| ·转基因植物根系抗逆分析 | 第50-52页 |
| ·GhRDR6 在植物抗病毒中的作用 | 第52-53页 |
| ·植物抗病毒相关基因的表达分析 | 第53-54页 |
| ·转基因植物抗冻分析 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| ·转基因本生烟对PVY 具有良好的抗病性 | 第55-56页 |
| ·超表达转基因植株具有抗冻性和弱的 ABA 敏感性 | 第56页 |
| ·超表达GhRDR6 转基因植株在幼苗生长中的作用 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第65页 |
