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农药残留ELISA速测试剂盒产业化技术研究--三唑磷、克百威ELISA试剂盒研制

目录第1-12页
致谢第12-13页
术语和缩略语表第13-15页
中文摘要第15-16页
ABSTRACT第16-18页
第一章 前言第18-43页
 1 农药残留生物快速测定方法概述第18-32页
   ·活体生物测定方法第18-19页
     ·用家蝇检测蔬菜中的残留农药第18页
     ·用大型水蚤为试验材料监测蔬菜中农药的残留第18-19页
     ·用发光细菌检测农药残留第19页
   ·酶抑制测定方法第19-21页
     ·胆碱酯酶抑制法第19-20页
     ·植物酯酶抑制法第20页
     ·有机磷水解酶法第20-21页
   ·免疫测定方法第21-32页
     ·半抗原的设计与合成第21-23页
     ·人工抗原的制备第23-24页
     ·抗体的制备第24-26页
     ·免疫分析方法第26-29页
     ·农药残留免疫检测新技术第29-30页
     ·不同标记免疫方法的优缺点第30-31页
     ·免疫分析方法及其试剂盒的质量控制第31-32页
 2 免疫测定技术在农药残留检测中的应用现状第32-37页
 3 三唑磷、克百威ELISA试剂盒研究现状第37-39页
 4 立题依据第39-43页
   ·开展ELISA产业化技术研究,是我国经济与社会发展的迫切需要第39-41页
     ·当前,我国食品卫生安全形势十分严峻第39-40页
     ·是加强我国农药残留监控与管理、完善农药残留检测(监测)体系的需要第40-41页
   ·本课题得到了有关单位和基金的资助第41-42页
     ·本课题得到了国家自然科学基金的资助第41-42页
     ·本课题得到了农业部农药检定所的资助第42页
     ·本课题得到了浙江来益生物技术有限公司的资助第42页
   ·开展农药ELISA研究,本研究所具有扎实的研究基础第42页
   ·三唑磷、克百威农药在农业生产中的应用现状第42-43页
第二章 三唑磷、克百威ELISA试剂盒研制第43-114页
 1 材料与方法第43-58页
   ·实验材料第43-46页
     ·试剂与药品第43-44页
     ·缓冲液第44-45页
     ·仪器与材料第45-46页
     ·实验动物第46页
   ·实验方法第46-58页
     ·半抗原的设计与合成第46-49页
     ·半抗原-蛋白质偶联物的制备及鉴定第49-50页
     ·酶标记抗体的制备第50页
     ·抗三唑磷、抗克百威单克隆抗体的制备第50-53页
     ·ELISA条件优化和方法的建立第53-57页
     ·ELISA定性、定量方法的确定第57-58页
 2 结果与分析第58-110页
   ·半抗原分子设计与结构鉴定第58-61页
     ·半抗原分子设计第58-60页
     ·三唑磷半抗原结构鉴定第60-61页
     ·克百威半抗原结构鉴定第61页
   ·人工抗原的鉴定与结合比测定第61-62页
     ·三唑磷人工抗原的鉴定与结合比测定第61-62页
     ·克百威人工抗原的鉴定与结合比测定第62页
   ·腹水效价测定第62页
   ·ELISA条件优化第62-73页
     ·酶标板的选择第62-63页
     ·包被缓冲液的选择第63-64页
     ·包被温度和时间的选择第64页
     ·洗涤次数对吸附的影响第64页
     ·不同封闭物对非特异性吸附的影响第64-65页
     ·抗体(抗原)/酶标记物工作浓度优化第65页
     ·不同溶剂对ELISA竞争结合反应的影响第65-66页
     ·酶的选择第66页
     ·点板时间对OD值影响试验第66-67页
     ·抗体亲和性和检测灵敏度第67-69页
     ·抗体的特异性第69-70页
     ·方法的准确性试验第70-71页
     ·稳定剂对抗体活性及保存期的影响第71-72页
     ·冻融试验第72-73页
   ·样品基质影响试验第73-77页
     ·不同样品基质对三唑磷ELISA方法的影响第73-75页
     ·不同样品基质对克百威ELISA方法的影响第75-77页
   ·添加回收率试验第77-100页
     ·样品中三唑磷添加回收率试验第77-87页
     ·样品中克百威添加回收率试验第87-100页
   ·样品各浓度处理组板内、板间ELISA测定值精密度统第100-103页
     ·三唑磷不同处理组板内、相同处理组板间ELISA测定值精密度统计第100-101页
     ·克百威不同处理组板内、相同处理组板间ELISA测定值精密度统计第101-103页
   ·处理组板内、板间ELISA测定值显著性检验第103-109页
     ·三唑磷不同添加浓度组间、相同添加浓度组板间ELISA测定值显著性检验第103-106页
     ·克百威不同添加浓度组间、相同添加浓度组板间ELISA测定值显著性检验第106-109页
   ·样品本底值及实际最低检测限设定第109-110页
 3 定性、定量判定方法第110页
 4 试剂盒构建第110-111页
 5 试剂盒比对与验证第111-114页
   ·与仪器比对第111-113页
     ·三唑磷ELISA试剂盒与仪器比对第111-112页
     ·克百威ELISA试剂盒与仪器比对第112-113页
   ·不同实验室比对试验第113-114页
第三章 ELISA试剂盒的产业化第114-128页
 1 ELISA试剂盒产业化生产的技术规程和技术要点第114-124页
   ·三唑磷、克百威半抗原中试合成工艺第114-116页
     ·克百威半抗原中试合成工艺第114-115页
     ·三唑磷半抗原中试合成工艺第115-116页
   ·半抗原-蛋白质偶联物制备工艺第116页
     ·半抗原-BSA偶联物第116页
     ·半抗原-OVA偶联物第116页
     ·半抗原-HRP偶联物第116页
     ·主要控制指标第116页
   ·单克隆抗体的生产制备工艺第116-121页
     ·动物的选择第116页
     ·骨髓瘤细胞的选择第116-117页
     ·小鼠免疫第117页
     ·细胞融合第117-119页
     ·单克隆抗体的克隆——有限稀释法第119页
     ·腹水制备与细胞冻存第119页
     ·细胞复苏第119-120页
     ·单克隆抗体的鉴定第120页
     ·单克隆抗体的纯化(辛酸-硫酸铵法)第120页
     ·无菌操作技术要点第120-121页
     ·实验器具的清洗与消毒第121页
   ·酶和底物的选择第121-123页
   ·ELISA操作方法的标准化第123-124页
     ·加样第123页
     ·温育第123页
     ·洗涤第123-124页
     ·比色第124页
 2 试剂盒生产企业标准(拟)第124页
 3 ELISA试剂盒生产(设备)投资概算第124-125页
   ·ELISA试剂盒生产成本核算第124页
   ·ELISA试剂盒生产(设备)投资概算第124-125页
 4 试剂盒生产的"三废"排放情况第125-126页
 5 试剂盒生产工艺流程第126页
 6 市场分析预测第126-128页
   ·市场容量分析第126页
   ·速测试剂盒的主要用途及用户分析第126页
   ·风险预测第126-128页
     ·政策风险第126-127页
     ·技术风险第127页
     ·市场风险第127页
     ·行业产品竞争风险第127-128页
第四章 总结与讨论第128-134页
 1 取得的成果第128页
 2 不足与展望第128-129页
 3 讨论第129-134页
   ·分子模拟方法在农药半抗原合理化设计中是一种重要的探索思路第130-131页
   ·统计检验分析是农药ELISA试剂盒产业化开发的重要环节第131-132页
   ·保存期是试剂盒产业化开发的重要条件第132-134页
参考文献第134-145页
在校期间发表的文章第145-146页
在校期间申请的国家发明专利第146-147页
附件第147-198页
 附件1 三唑磷ELISA试剂盒使用说明书第147-158页
 附件2 克百威ELISA试剂盒使用说明书第158-169页
 附件3 国家农药检定所试剂盒应用证明第169-174页
 附件4 农业部环境质量监督检验测试中心(天津)试剂盒应用证明第174-177页
 附件5 农业部农药质量监督检验测试中心(上海)试剂盒应用证明第177-182页
 附件6 浙江省农药检定管理所试剂盒应用证明第182-186页
 附件7 浙江省出入境检验检疫局试剂盒应用证明第186-190页
 附件8 三唑磷、克百威ELISA试剂盒生产标准第190-198页
 附件9 三唑磷、克百威ELISA试剂盒产品宣传单第198页

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