| 第一章 绪论 | 第1-39页 |
| ·PRRSV研究进展 | 第15-28页 |
| ·PRRS和PRRSV | 第15-16页 |
| ·PRRSV感染的细胞生物学 | 第16-17页 |
| ·PRRSV的复制、转录和翻译 | 第17-18页 |
| ·PRRSV的复制酶蛋白 | 第18-20页 |
| ·PRRSV的主要结构蛋白 | 第20-22页 |
| ·PRRSV的次要结构蛋白 | 第22-24页 |
| ·PRRSV的免疫抑制和持续性感染 | 第24-25页 |
| ·细胞凋亡与PRRSV致病的关系 | 第25-26页 |
| ·准种、异常RNA与PRRSV致病的关系 | 第26-28页 |
| ·PRRSV的防制策略 | 第28页 |
| ·RNAi研究进展 | 第28-38页 |
| ·RNAi概述 | 第28-29页 |
| ·RNAi的分子机制 | 第29-33页 |
| ·哺乳动物细胞中特殊的RNAi现象 | 第33-34页 |
| ·RNAi的应用 | 第34-36页 |
| ·RNAi的局限性及应用前景 | 第36-38页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二章 基于PCR扩增的shRNA表达盒快速筛选PRRSVN蛋白特异的有效siRNA序列 | 第39-52页 |
| ·材料与方法 | 第40-45页 |
| ·质粒、细胞和病毒 | 第40页 |
| ·试剂、抗体 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·siRNA的筛选和shRNA表达盒的设计 | 第41页 |
| ·shRNA表达盒的扩增和纯化 | 第41-42页 |
| ·表达N-EGFP融合蛋白载体的构建 | 第42-43页 |
| ·病毒CCID_(50)的测定 | 第43-44页 |
| ·用shRNA-PCR转染293T细胞 | 第44页 |
| ·N-EGFP融合蛋白稳定表达293T细胞系的筛选 | 第44页 |
| ·PCR-shRNA转染MARC-145及PRRSV的感染 | 第44页 |
| ·间接免疫荧光法检测shRNA-PCR对PRRSV的抑制 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-49页 |
| ·一步PCR法扩增shRNA表达盒 | 第45页 |
| ·Karber法计算病毒滴度 | 第45-46页 |
| ·pEGFP-ORF7重组质粒的鉴定 | 第46页 |
| ·shRNA-PCR抑制N-EGFP融合蛋白的表达 | 第46-47页 |
| ·shRNA179-PCR在N-EGFP稳定表达细胞系上的效果 | 第47页 |
| ·shRNA179-PCR抑制了PRRSV特异性细胞病变的产生 | 第47-48页 |
| ·shRNA179-PCR减少PRRSV感染细胞中的N蛋白阳性细胞 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 基于载体表达的shRNA在MARC-145细胞上对PRRSV复制抑制的研究 | 第52-70页 |
| ·材料与方法 | 第52-58页 |
| ·质粒、细胞和病毒 | 第52页 |
| ·试剂、抗体 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·引物探针设计 | 第53-54页 |
| ·shRNA表达载体的构建 | 第54页 |
| ·shRNA表达载体的纯化 | 第54页 |
| ·shRNA表达载体的转染 | 第54页 |
| ·IFA检测shRNA表达载体对PRRSV复制的抑制 | 第54页 |
| ·Western-blot检测N蛋白表达变化及抑制作用的剂量依赖性 | 第54-55页 |
| ·荧光定量PCR检测抑制效果 | 第55-58页 |
| ·毒价滴定检测抑制效果 | 第58页 |
| ·结果 | 第58-65页 |
| ·shRNA表达盒的扩增和shRNA表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·shRNA表达载体抑制PRRSV引起的特异性细胞病变 | 第59-60页 |
| ·shRNA表达载体减少PRRSV阳性细胞 | 第60-61页 |
| ·shRNA表达载体在蛋白水平减少N蛋白表达 | 第61页 |
| ·shRNA表达载体在RNA水平减少N蛋白表达 | 第61-65页 |
| ·shRNA表达载体对病毒毒价的影响 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-70页 |
| 第四章 PRRSV ORF2～4特异siRNA的筛选及其抑制效果的研究 | 第70-82页 |
| ·材料与方法 | 第71-74页 |
| ·质粒、细胞和病毒 | 第71页 |
| ·试剂 | 第71页 |
| ·仪器 | 第71页 |
| ·ORF2、ORF3、ORF4的扩增及克隆载体的构建 | 第71-72页 |
| ·Taqman探针及引物的设计 | 第72页 |
| ·siRNA筛选及shRNA表达盒设计 | 第72-73页 |
| ·shRNA表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·shRNA表达载体的转染及病毒的感染 | 第74页 |
| ·荧光定量PCR检测抑制效果 | 第74页 |
| ·病毒毒价滴定检测抑制效果 | 第74页 |
| ·结果 | 第74-79页 |
| ·shRNA的扩增及表达载体的构建 | 第74-75页 |
| ·ORF2、ORF3、ORF4的扩增及重组质粒的鉴定 | 第75-76页 |
| ·shRNA表达载体抑制PRRSV特异性细胞病变 | 第76页 |
| ·荧光定量PCR检测ORF2、ORF3和ORF4 mRNA的表达变化 | 第76-78页 |
| ·病毒毒价滴定结果 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| 第五章 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 作者简历 | 第100页 |
