| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| Introduction | 第8-20页 |
| 1. The TNFα signaling pathway | 第8-15页 |
| ·The TNFα induced NF-κB signaling pathway | 第9-10页 |
| ·The JNK signaling pathway | 第10-14页 |
| ·How does TNFα induce JNK activation? | 第10-11页 |
| ·JNK induces apoptosis by several ways | 第11-14页 |
| ·JNK induces apoptosis through mitochondrial pathway | 第11-13页 |
| ·JNK induces apoptosis by non-mitocondrial pathway | 第13-14页 |
| ·The crosstalk between NF-κB and JNK determines TNF-α cytotoxicity | 第14-15页 |
| 2. Miz1 regulates the JNK signaling pathway | 第15-17页 |
| ·Miz1 protein and its well-known funtion | 第15-16页 |
| ·Miz1 play a role in cytoplasm by combinding to TRAF2 | 第16-17页 |
| 3. The ubiquitination system | 第17-20页 |
| ·The ubiquitination pathway | 第17-18页 |
| ·HECT-Type E3 ligases | 第18-20页 |
| ·General Overview of the HECT-Type E3s | 第18-19页 |
| ·Mule: an important member of the Single-HECT E3s | 第19-20页 |
| Materials and methods | 第20-30页 |
| 1. Materials | 第20-22页 |
| ·Bacteria and Plasmids | 第20-21页 |
| ·Proteins and Adenovirus | 第21页 |
| ·Reagent and Antibody | 第21页 |
| ·SiRNA synthesis ans sequence | 第21页 |
| ·Cell lines | 第21-22页 |
| 2.Methods | 第22-30页 |
| ·Mass Spectrometry | 第22页 |
| ·Cell Culture and Apoptosis Assays | 第22页 |
| ·Plasmids preparation | 第22-26页 |
| ·Mini-prep procedure | 第22-23页 |
| ·Large-prep procedure | 第23-26页 |
| ·transfection | 第26页 |
| ·Gene transfection | 第26页 |
| ·SiRNA transfection | 第26页 |
| ·western blot | 第26-27页 |
| ·preparation of cell extraction (6-well plate) | 第26-27页 |
| ·Running gel, transferring and blocking | 第27页 |
| ·Coimmunoprecipitation | 第27-28页 |
| ·Purification of GST-Xpress-Miz1 protein | 第28-29页 |
| ·In Vitro Ubiquitination Assay | 第29页 |
| ·In Vivo Ubiquitination Assay | 第29-30页 |
| ·Cell Fractionation | 第30页 |
| ·Purification of His-Tagged Xpress-Miz1 | 第30页 |
| Results | 第30-41页 |
| 1. Mule Is Required for TNFα-Induced Miz1 Degradation | 第30-33页 |
| 2. Mule Ubiquitinates Miz1 in Vitro | 第33-35页 |
| 3. Mule Regulates Miz1 K48-Linked Polyubiquitination and Degradation in Vivo | 第35-36页 |
| 4. TNFα Promotes Interaction Between Mule and Miz1 | 第36-38页 |
| 5. Mule Regulates TNFα-Induced JNK Activation by Targeting Miz1 for Degradation | 第38-39页 |
| 6. Mule Regulates TNFα-Induced Cell Death | 第39-41页 |
| Supplemental data | 第41-42页 |
| Discussion | 第42-45页 |
| Reference | 第45-50页 |
| Acknowledgement | 第50-51页 |
