| 第一章 综述——参与神经节苷脂合成的糖基转移酶与肿瘤转移的关系 | 第1-17页 |
| 1 糖基转移酶与肿瘤转移的关系 | 第10-13页 |
| 2 神经节苷脂GM3与肿瘤转移的关系 | 第13-17页 |
| 第二章 用基因芯片和实时定量 PCR技术检测小鼠乳腺癌细胞中差异表达的糖基转移酶基因 | 第17-29页 |
| 1 材料 | 第17-18页 |
| ·细胞系 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·仪器 | 第17页 |
| ·基因芯片的材料 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·实时定量PCR 的材料 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18-24页 |
| ·细胞培养 | 第18-19页 |
| ·基因芯片实验和分析方法 | 第19-22页 |
| ·总RNA 抽提（TRIzol 法） | 第19页 |
| ·总RNA 的纯化 | 第19页 |
| ·荧光探针的制备（采取反转录cDNA 第一链标记） | 第19-20页 |
| ·荧光探针的制备（cDNA 第一链标记） | 第19-20页 |
| ·荧光探针的纯化（QIAquick Nucleotide Removal Kit） | 第20页 |
| ·荧光探针的定量 | 第20页 |
| ·芯片杂交 | 第20-21页 |
| ·芯片洗涤 | 第21页 |
| ·数据分析 | 第21-22页 |
| ·通过使Agilent Scanner 获取图像 | 第21页 |
| ·数据读取 | 第21页 |
| ·标准化处理 | 第21-22页 |
| ·Ratio 分析 | 第22页 |
| ·实时定量PCR 的实验和分析方法 | 第22-24页 |
| ·总RNA 抽提(异硫氰酸胍法） | 第22页 |
| ·制备用于绘制标准曲线的梯度稀释DNA 模板 | 第22-23页 |
| ·进行Realtime PCR 反应 | 第23-24页 |
| ·结果与计算 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-28页 |
| ·细胞RNA 质量的分析 | 第24-25页 |
| ·基因芯片测试结果分析 | 第25-27页 |
| ·实时定量PCR 测试结果分 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 突变细胞株的构建 | 第29-46页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-40页 |
| ·RNAi 载体构建 | 第30-35页 |
| ·采用碱裂解法制备质粒DNA | 第31-32页 |
| ·双酶切载体 | 第32页 |
| ·目的条带的回收 | 第32页 |
| ·siRNA 对应的DNA 的退 | 第32页 |
| ·片段与载体相连 | 第32-33页 |
| ·转化 | 第33-34页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第34页 |
| ·阳性克隆的菌株保存及测序 | 第34-35页 |
| ·RNAi 载体转染入4T1 细胞及稳定克隆的筛选 | 第35页 |
| ·ST3GalV 过表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·67NR 细胞总RNA 的提取 | 第35页 |
| ·RT-PCR | 第35页 |
| ·用PCR 扩增获得ST3GalV 的cDNA | 第35-36页 |
| ·双酶切载体与片段 | 第36页 |
| ·目的条带的回收 | 第36页 |
| ·片段与载体相连 | 第36-37页 |
| ·转化 | 第37页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第37-38页 |
| ·PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| ·酶切鉴定 | 第38页 |
| ·阳性克隆的菌株保存及测序 | 第38页 |
| ·过表达载体转染入4T1 细胞及稳定克隆的筛选 | 第38页 |
| ·用半定量PCR 检测干扰效率 | 第38-40页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第38页 |
| ·RT-PCR | 第38页 |
| ·用半定量PCR 检测ST3GalV 的mRNA 水平 | 第38-39页 |
| ·用定量PCR 检测ST3GalV 的mRNA 水平 | 第39页 |
| ·用免疫荧光法检测GM3 的量 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 体外实验 | 第46-52页 |
| 1 材料 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-47页 |
| ·增殖实验 | 第46页 |
| ·迁移实验 | 第46-47页 |
| ·侵袭实验 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-51页 |
| ·增殖实验 | 第47-48页 |
| ·迁移实验 | 第48-50页 |
| ·侵袭实验 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 第五章 体内实验 | 第52-56页 |
| 1 材料 | 第52页 |
| ·动物品系 | 第52页 |
| ·细胞系 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·仪器 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| ·动物模型制备 | 第52页 |
| ·处死荷瘤小鼠 | 第52-53页 |
| ·原代培养 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-55页 |
| ·小鼠的原位瘤重量与肺转移结节数 | 第53-54页 |
| ·半定量RT－PCR | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 第六章 ST3GalV 调节肿瘤转移的分子机制的初步探讨 | 第56-60页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| ·细胞系 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56-57页 |
| ·仪器 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-58页 |
| ·收集细胞与蛋白定量 | 第57页 |
| ·Western Blotting | 第57-58页 |
| ·蛋白电泳 | 第57页 |
| ·转膜 | 第57页 |
| ·封闭 | 第57页 |
| ·加一抗 | 第57页 |
| ·洗涤 | 第57页 |
| ·加二抗 | 第57页 |
| ·洗涤 | 第57-58页 |
| ·显影与定影 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 总结与展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
