| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一篇 文献综述 | 第10-30页 |
| 第一章 幽门螺旋杆菌疫苗研究现状 | 第10-16页 |
| 1 Hp粘膜免疫应答机制 | 第10-11页 |
| 2 Hp保护性抗原 | 第11-15页 |
| ·细胞毒素相关蛋白(cytotoxin-associated protein A，CagA) | 第11-13页 |
| ·空泡毒素(Vacuolating cytotoxin A，VacA) | 第13页 |
| ·尿素酶及其亚单位(Urease) | 第13-14页 |
| ·热休克蛋白(Heat shock protein，Hsp) | 第14-15页 |
| ·粘附素 | 第15页 |
| ·过氧化氢酶(catalase，Kat) | 第15页 |
| 3 展望 | 第15-16页 |
| 第二章 粘膜免疫佐剂和连接肽 | 第16-19页 |
| 1 霍乱毒素(cholera toxin，CT)及其亚单位 | 第16-17页 |
| 2 大肠杆菌热不稳定肠毒素(Escherichia coli heat-labile enterotoxin，LT)及其亚单位 | 第17-18页 |
| 3 连接肽 | 第18-19页 |
| 第三章 利用转基因植物生产疫苗的研究进展 | 第19-30页 |
| 1 植物生产疫苗的可行性和必然性 | 第19-22页 |
| 2 转基因植物疫苗的研究现状 | 第22-25页 |
| 3 转基因植物疫苗存在的问题和解决办法 | 第25-30页 |
| ·优化植物疫苗的表达水平 | 第25-27页 |
| ·选择合适的强启动子或组织特异性启动子 | 第25-26页 |
| ·目的基因的修饰 | 第26页 |
| ·将蛋白定位于叶绿体 | 第26页 |
| ·将蛋白定位于内质网 | 第26-27页 |
| ·选择适当的植物表达载体 | 第27页 |
| ·受体植物的选择 | 第27页 |
| ·优化免疫途径 | 第27-28页 |
| ·植物疫苗的生物安全性 | 第28页 |
| ·基因沉默 | 第28-30页 |
| 第二篇 研究报告 | 第30-88页 |
| 第一章 含CTB和CAGA基因的植物表达载体的构建及其在烟草中的转化 | 第30-41页 |
| 1 材料和方法 | 第30-35页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第30-31页 |
| ·基因 | 第31页 |
| ·植物材料 | 第31页 |
| ·酶及主要试剂 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·植物表达载体p1301-35SCC_1N的构建 | 第31-32页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第32-34页 |
| ·转化植株的鉴定 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-39页 |
| ·p1301-35SCC_1N植物表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·烟草转化植株的获得 | 第36-38页 |
| ·转化植株的鉴定 | 第38-39页 |
| ·报告基因的检测 | 第38页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第二章 CTB-CAGA和CTB-UREB融合基因植物表达载体的构建 | 第41-65页 |
| 1 材枓与方法 | 第41-52页 |
| ·实验材料 | 第41-45页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·质粒 | 第41-44页 |
| ·目的基因 | 第44-45页 |
| ·酶及主要试剂 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-52页 |
| ·质粒DNA的碱法小量快速提取 | 第45-46页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第46-47页 |
| ·DNA定量 | 第47页 |
| ·DNA酶切 | 第47页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第47页 |
| ·DNA片段回收 | 第47-48页 |
| ·DNA连接 | 第48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第48-49页 |
| ·DNA转化大肠杆菌 | 第49页 |
| ·连接产物的酶切鉴定 | 第49页 |
| ·质粒DNA的PCR验证 | 第49页 |
| ·质粒的测序 | 第49页 |
| ·原核表达 | 第49-51页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| ·质粒DNA转化农杆菌 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-60页 |
| ·p23-35SCLUN表达载体的构建 | 第52-55页 |
| ·p23-35SCLC_2N表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·重组表达载体的PCR验证 | 第56页 |
| ·序列测定 | 第56-59页 |
| ·pB1121-CLUN表达载体的构建 | 第59页 |
| ·原核表达载体pET28a-CLU的构建 | 第59页 |
| ·融合蛋白的诱导表达和鉴定 | 第59-60页 |
| ·融合蛋白的Western杂交验证 | 第60页 |
| ·质粒p23-35SCLUN、p23-35SCLC_2N、p121-CLUb／转入农杆菌GV3101 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-65页 |
| ·Hp保护性抗原基因的选用 | 第60-61页 |
| ·黏膜佐剂的选用 | 第61页 |
| ·融合基因的构建 | 第61页 |
| ·质粒载体和重组方法的选用 | 第61-62页 |
| ·融合蛋白的Western杂交验证 | 第62-65页 |
| 第三章 融合基因CTB-UREB和CTB- CAGA2在烟草中的转化 | 第65-74页 |
| 1 材料与方法 | 第65-68页 |
| ·实验材料 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-68页 |
| ·无菌苗的获得 | 第65页 |
| ·农杆菌介导的烟草叶盘法转化 | 第65页 |
| ·PCR检测转化植株 | 第65-66页 |
| ·Souther杂交检测转化植株 | 第66-68页 |
| ·植物可溶性蛋白的提取 | 第68页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第68页 |
| ·Western-blot杂交 | 第68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-72页 |
| ·不同浓度卡那霉素对烟草叶片再生的影响 | 第68-69页 |
| ·烟草转化植株的获得 | 第69-70页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第70-71页 |
| ·转基因植株的Southern和PCR-Southern杂交鉴定 | 第71-72页 |
| ·烟草叶片可溶性蛋白的凝胶电泳 | 第72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| ·关于转化体的选择培养 | 第72-73页 |
| ·关于转基因材料的检测 | 第73-74页 |
| 第四章 融合基因CTB-UREB和CTB- CAGA2在番茄中的转化 | 第74-88页 |
| 1 材料和方法 | 第74-78页 |
| ·实验材料 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-78页 |
| ·番茄无菌苗的获得和外植体的准备 | 第75页 |
| ·番茄高频再生体系的探索 | 第75-76页 |
| ·农杆菌介导的番茄转化体系的优化研究 | 第76-77页 |
| ·转化植株的PCR鉴定 | 第77-78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-84页 |
| ·番茄高频再生体系的建立 | 第78-80页 |
| ·不同培养基类型对番茄子叶再生的影响 | 第78页 |
| ·番茄不同外植体类型对再生的影响 | 第78页 |
| ·不同苗龄的番茄外植体对再生的影响 | 第78页 |
| ·不同浓度潮霉素对番茄子叶再生的影响 | 第78-79页 |
| ·不同浓度卡那霉素对番茄外植体再生的影响 | 第79页 |
| ·不同浓度头孢霉素对番茄外植体再生的影响 | 第79页 |
| ·不同切苗方式对番茄子叶再生的影响 | 第79-80页 |
| ·不同基因型的番茄外植体再生频率的比较 | 第80页 |
| ·番茄转化植株的获得 | 第80-81页 |
| ·番茄转化植株的PCR鉴定 | 第81页 |
| ·番茄高频转化体系的建立 | 第81-84页 |
| ·不同培养基类型对不同基因型的番茄外植体转化后Kan抗性芽分化的影响 | 第81-82页 |
| ·不同苗龄和外植体类型对番茄“中蔬4号”转化率的影响(培养基：MB) | 第82-83页 |
| ·不同植物表达载体对番茄外植体转化后再生频率的影响(培养基：MZ) | 第83-84页 |
| ·转化番茄的生根培养 | 第84页 |
| 3 讨论 | 第84-88页 |
| 参考文献 | 第88-96页 |
| 缩略词表 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
