苏云金芽孢杆菌WB50菌株vip3A基因和几丁质酶基因的定位
| 摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| Ⅰ 绪论 | 第13-30页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的研究现状 | 第13-19页 |
| ·历史 | 第13-14页 |
| ·血清学分类 | 第14-16页 |
| ·作用范围 | 第16页 |
| ·生物活性物质及作用机制 | 第16-17页 |
| ·遗传多样性 | 第17-19页 |
| ·质粒多态性 | 第17-18页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因多态性 | 第18-19页 |
| ·苏云金芽孢杆菌基因定位的研究现状 | 第19-24页 |
| ·基因定位的重要意义 | 第19页 |
| ·苏云金芽孢杆菌cry基因定位 | 第19-22页 |
| ·苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因的定位 | 第22-24页 |
| ·营养期杀虫蛋白及其基因 | 第24-28页 |
| ·营养期杀虫蛋白的类型及结构 | 第24-25页 |
| ·营养期杀虫蛋白的杀虫特异性和作用机制 | 第25-27页 |
| ·营养期杀虫蛋白基因的克隆、表达及定位 | 第27-28页 |
| ·问题与展望 | 第28-30页 |
| Ⅱ 苏云金芽孢杆菌vip3A基因的克隆 | 第30-41页 |
| 1 材料与方法 | 第30-35页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第30-31页 |
| ·微量碱裂解法 | 第30-31页 |
| ·电泳分析 | 第31页 |
| ·vip3A基因PCR扩增分析 | 第31-32页 |
| ·引物 | 第31-32页 |
| ·反应体系 | 第32页 |
| ·热循环参数 | 第32页 |
| ·扩增产物的回收纯化 | 第32-33页 |
| ·连接反应 | 第33-34页 |
| ·转化 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·转化和筛选 | 第34页 |
| ·重组克隆子的鉴定 | 第34-35页 |
| ·提取重组质粒 | 第34页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·序列测定及同源性比较 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-40页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第35页 |
| ·阳性克隆子的证实 | 第35-36页 |
| ·序列测定及同源性分析结果 | 第36-40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| Ⅲ 苏云金芽孢杆菌vip3A基因的定位 | 第41-53页 |
| 1 材料与方法 | 第41-46页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| ·DNA样品的制备 | 第41-42页 |
| ·煮沸裂解法 | 第41页 |
| ·微量碱裂解法 | 第41页 |
| ·BGSC法 | 第41页 |
| ·改良的碱裂解法 | 第41-42页 |
| ·总DNA模板的制备 | 第42页 |
| ·染色体DNA的制备 | 第42页 |
| ·电泳分析 | 第42-43页 |
| ·分离、回收质粒条带 | 第43页 |
| ·vip3A基因的初步定位 | 第43页 |
| ·探针制备及标记 | 第43-44页 |
| ·探针制备 | 第43-44页 |
| ·探针标记 | 第44页 |
| ·Southern转移 | 第44-45页 |
| ·固定 | 第45页 |
| ·Southern杂交 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-50页 |
| ·BGSC法 | 第46页 |
| ·碱裂解法制备质粒DNA的比较 | 第46-47页 |
| ·总DNA及染色体DNA的制备 | 第47页 |
| ·vip3A基因的初步定位 | 第47-49页 |
| ·DNA样品上vip3A基因的PCR扩增分析 | 第47-48页 |
| ·回收质粒DNA条带 | 第48页 |
| ·回收质粒的PCR扩增vip3A基因分析 | 第48-49页 |
| ·vip3A基因的定位 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-53页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第50-51页 |
| ·总DNA的提取 | 第51-52页 |
| ·Southern blotting | 第52页 |
| ·vip3A基因的定位 | 第52-53页 |
| Ⅳ 苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因的定位 | 第53-58页 |
| 1 材料与方法 | 第53-55页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-55页 |
| ·DNA样品的制备 | 第53页 |
| ·几丁质酶基因的初步定位 | 第53-54页 |
| ·PCR扩增的引物 | 第53-54页 |
| ·反应体系 | 第54页 |
| ·热循环参数 | 第54页 |
| ·电泳分析 | 第54页 |
| ·几丁质酶基因的定位 | 第54-55页 |
| ·探针的制备 | 第54页 |
| ·探针的标记 | 第54-55页 |
| ·Southern杂交 | 第55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-57页 |
| ·几丁质酶基因的初步定位 | 第55-56页 |
| ·几丁质酶基因的定位 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| Ⅴ 小结 | 第58-61页 |
| 1 质粒DNA制备方法的探讨 | 第58-59页 |
| 2 Southern blotting | 第59页 |
| 3 vip3A基因的定位 | 第59-60页 |
| 4 几丁质酶基因的定位 | 第60页 |
| 5 下一步研究的问题 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录1 缩写词和中英文对照 | 第67-68页 |
| 附录2 本研究使用的试剂与溶液的配制 | 第68-72页 |
| 附录3 硕士期间发表(或待发表)论文 | 第72-73页 |
| 附录4 硕士期间在GenBank上的登录号 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
