| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 对虾病毒及现代检测技术研究进展 | 第7-25页 |
| 第一节 对虾病毒研究进展 | 第7-15页 |
| 1 细小病毒科(Parvoviridae) | 第7-9页 |
| ·肝胰腺细小病毒(Hepatopancreatic Parvovirus,HPV) | 第7页 |
| ·传染性皮下及造血器官坏死病毒(Infectious Hypodermal and Haematopoietic Necrosis Virus,IHHNV) | 第7-9页 |
| 2 杆状病毒(Baculoviridae) | 第9页 |
| ·对虾杆状病毒(Baculovirus Penaei,BP) | 第9页 |
| ·斑节对虾杆状病毒(Monodon Baculovirus,MBV) | 第9页 |
| 3 Dicistroviridae | 第9-11页 |
| 4 Nidoviridae | 第11页 |
| ·对虾黄头病毒(Yellow head virus,YHV) | 第11页 |
| ·鳃联病毒(Gill-associated Virus,GAV) | 第11页 |
| 5 对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)研究进展 | 第11-15页 |
| 第二节 现代生物检测技术和对虾病毒检测研究进展 | 第15-24页 |
| 1 免疫检测技术 | 第16-18页 |
| ·酶联免疫检测技术 | 第16页 |
| ·荧光免疫分析 | 第16-17页 |
| ·免疫胶体金诊断技术 | 第17-18页 |
| 2 核酸检测技术 | 第18-24页 |
| ·核酸杂交 | 第18-19页 |
| ·聚合酶连反应(PCR) | 第19-24页 |
| 第三节 本论文研究背景、目的和意义 | 第24-25页 |
| 1 本论文的研究背景 | 第24页 |
| 2 本论文的研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 复合核酸点杂交检测技术的建立 | 第25-36页 |
| 1 材料与方法 | 第25-30页 |
| ·需要的溶液和试剂 | 第25页 |
| ·探针的制备 | 第25-27页 |
| ·样品处理 | 第27页 |
| ·双探针点杂交检测程序 | 第27-28页 |
| ·三探针点杂交检测程序 | 第28-29页 |
| ·检测体系特异性和灵敏性的评估 | 第29-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-33页 |
| ·探针浓度测定 | 第30-31页 |
| ·检测结果判断 | 第31页 |
| ·检测结果 | 第31-33页 |
| ·检测特异性与灵敏性 | 第33页 |
| 3 讨论 | 第33-36页 |
| 第三章 RT-PCR ELISA同时检测WSSV,TSV和HPV方法的建立 | 第36-45页 |
| 1 材料与方法 | 第37-39页 |
| ·样品 | 第37页 |
| ·总核酸的抽提 | 第37页 |
| ·引物和探针的合成 | 第37页 |
| ·复合RT-PCR标记地高辛 | 第37-38页 |
| ·固相杂交检测 | 第38-39页 |
| ·对照设置 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-42页 |
| ·复合RT-PCR标记体系的优化和扩增产物凝胶电泳分析 | 第39-40页 |
| ·固相杂交条件优化 | 第40页 |
| ·结果判断和检测特异性分析 | 第40-42页 |
| ·样品检测与敏感性分析 | 第42页 |
| 3 讨论 | 第42-45页 |
| 第四章 Taura Syndrome Virus主要结构蛋白基因克隆与原核表达 | 第45-53页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·核酸、菌株与质粒 | 第45页 |
| ·酶类及试剂 | 第45页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·基因扩增 | 第46页 |
| ·目的片断的克隆 | 第46-47页 |
| ·目的片断的表达 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-51页 |
| ·PCR扩增 | 第47页 |
| ·重组克隆质粒的构建与酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·表达重组质粒构建和酶切鉴定 | 第48页 |
| ·基因的表达 | 第48-50页 |
| ·可溶性检测 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录Ⅰ: 主要试剂的配置方法 | 第61-62页 |
| 附录Ⅱ: 在读期间申请的专利和发表的论文 | 第62页 |