| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-28页 |
| 1 玉米细菌性枯萎病菌的概述 | 第10-14页 |
| ·玉米细菌性枯萎病菌的生物学 | 第10-12页 |
| ·玉米细菌性枯萎病菌的检测方法 | 第12-14页 |
| ·直观检查 | 第12-13页 |
| ·分离病原 | 第13-14页 |
| 2 植物病原细菌分子生物学检测技术研究进展 | 第14-26页 |
| ·基因组指纹技术在植物病原细菌群体多样性研究中的应用 | 第14-16页 |
| ·RAPD基因组指纹技术 | 第14页 |
| ·扩增片段长度多态性 | 第14-15页 |
| ·rep-PCR技术 | 第15-16页 |
| ·PCR技术在检测与病害诊断中的应用 | 第16-19页 |
| ·特异性基因或DNA序列用于检测和鉴定病原菌 | 第16-19页 |
| ·核酸杂交技术 | 第19-26页 |
| ·PCR-ELISA技术 | 第19页 |
| ·实时荧光PCR检测技术 | 第19-26页 |
| ·生物芯片检测技术 | 第26页 |
| 3 本文的目的和意义 | 第26-28页 |
| ·建立玉米细菌性枯萎病菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法 | 第26-28页 |
| 第二章 TaqMan探针实时荧光PCR检测玉米细菌性枯萎病菌 | 第28-44页 |
| 1 材料和方法 | 第28-35页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·细菌和植原体 | 第28页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·深圳局送检DNA样品 | 第28页 |
| ·仪器试剂 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-33页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·细菌基因组DNA的抽提 | 第30页 |
| ·细菌的接种以及感病植株组织中细菌基因组DNA的准备 | 第30页 |
| ·细菌菌悬浮液的准备 | 第30页 |
| ·玉米细菌性枯萎病菌16S rDNA基因PCR扩增 | 第30-32页 |
| ·PCR产物电泳分析 | 第31页 |
| ·克隆和转化 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的回收 | 第31页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第31-32页 |
| ·克隆的筛选 | 第32页 |
| ·质粒的提取和酶切 | 第32-33页 |
| ·质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·质粒的酶切 | 第33页 |
| ·克隆片段同源性分析 | 第33页 |
| ·实时荧光PCR检测方法的建立 | 第33-35页 |
| ·TaqMan探针与引物的设计和合成 | 第33-34页 |
| ·实时荧光PCR检测 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-44页 |
| ·实时荧光PCR体系优化 | 第35-37页 |
| ·探针筛选 | 第35页 |
| ·引物优化 | 第35-36页 |
| ·探针浓度优化 | 第36页 |
| ·Mg~(2+)浓度优化 | 第36-37页 |
| ·Taq酶用量和dNTP浓度的优化 | 第37页 |
| ·UNG酶防污染技术 | 第37页 |
| ·TaqMan探针Pantoea stewartii subsp. stewartii对扩增的特异性 | 第37-38页 |
| ·实时荧光PCR检测灵敏度 | 第38-40页 |
| ·绝对灵敏度 | 第38-39页 |
| ·菌液稀释梯度灵敏度 | 第39-40页 |
| ·相对灵敏度 | 第40页 |
| ·PCR产物克隆 | 第40-43页 |
| ·对深圳检疫局送检Pantoea spp.DNA样品的检测 | 第43-44页 |
| 第三章 结论和讨论 | 第44-48页 |
| 1 关于核酸的提取、纯化与PCR抑制剂的去除 | 第44页 |
| 2 关于PCR反应条件的优化 | 第44-45页 |
| 3 关于PCR产物的克隆及序列测定 | 第45页 |
| 4 关于实时荧光PCR | 第45-48页 |
| ·影响探针检测灵敏度的几个可能因素 | 第46页 |
| ·UNG酶及实验室的核酸污染问题 | 第46页 |
| ·荧光PCR检测的优点及不足 | 第46-48页 |
| 第四章 结论和创新点 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 缩略语表 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 个人简历 | 第60页 |
