人肌红蛋白基因合成、原核表达及单克隆抗体制备
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 绪论 | 第10-17页 |
| ·肌红蛋白及其应用 | 第10-11页 |
| ·肌红蛋白分子结构及功能 | 第10页 |
| ·肌红蛋白生物学功能 | 第10-11页 |
| ·肌红蛋白临床应用 | 第11页 |
| ·人工合成全基因 | 第11-13页 |
| ·合成全基因研究进展 | 第11-12页 |
| ·两步法合成全基因原理和方法 | 第12-13页 |
| ·原核表达及蛋白纯化 | 第13-14页 |
| ·原核表达系统 | 第13-14页 |
| ·蛋白纯化 | 第14页 |
| ·单克隆抗体制备 | 第14-16页 |
| ·单克隆抗体制备原理及方法 | 第14-15页 |
| ·单克隆抗体在临床上的应用 | 第15-16页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 2 人肌红蛋白原核表达及纯化 | 第17-34页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·实验菌株及载体 | 第17-18页 |
| ·主要试剂与药品 | 第18页 |
| ·溶液的配制 | 第18-20页 |
| ·实验仪器设备 | 第20页 |
| ·试验方法 | 第20-27页 |
| ·人肌红蛋白全基因合成 | 第20-22页 |
| ·克隆载体构建 | 第22-24页 |
| ·表达载体构建 | 第24-26页 |
| ·IPTG诱导表达 | 第26-27页 |
| ·His-Myo融合蛋白纯化 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-32页 |
| ·Myo全基因合成 | 第27-28页 |
| ·克隆载体构建 | 第28-29页 |
| ·Myo基因序列分析 | 第29-30页 |
| ·Myo-pET-28a表达载体构建 | 第30-31页 |
| ·His-Myo融合蛋白条件优化及可溶性检测 | 第31-32页 |
| ·His-Myo融合蛋白纯化 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 3 抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备 | 第34-51页 |
| ·实验材料 | 第34-37页 |
| ·实验动物及细胞株 | 第34页 |
| ·主要试剂与药品 | 第34页 |
| ·溶液的配制 | 第34-37页 |
| ·实验仪器设备 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-44页 |
| ·动物免疫 | 第37-38页 |
| ·抗体效价检测 | 第38页 |
| ·细胞融合 | 第38-39页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第39页 |
| ·有限稀释法进行杂交瘤细胞的亚克隆 | 第39-40页 |
| ·阳性亚克隆细胞的冻存及扩大培养 | 第40页 |
| ·抗体的纯化与透析 | 第40-41页 |
| ·抗体效价测定 | 第41-42页 |
| ·抗体的标记 | 第42页 |
| ·单克隆抗体表位分析 | 第42-43页 |
| ·抗体纯度鉴定 | 第43-44页 |
| ·Western Blot检测 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-49页 |
| ·免疫小鼠血清中抗体效价检测 | 第44-45页 |
| ·细胞融合结果 | 第45页 |
| ·阳性杂交瘤细胞克隆筛选结果 | 第45页 |
| ·阳性杂交瘤细胞亚克隆筛选结果 | 第45-46页 |
| ·抗体纯化及抗体效价检测 | 第46页 |
| ·抗体纯度鉴定 | 第46-47页 |
| ·单克隆抗体表位分析结果 | 第47页 |
| ·筛选配对单克隆抗体 | 第47-48页 |
| ·表达纯抗原鉴定所筛选抗体 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
