| 第一章 文献综述 | 第1-43页 |
| 1 有关疫苗的研究概况 | 第13-16页 |
| ·传统意义上的疫苗 | 第13-14页 |
| ·活疫苗 | 第13-14页 |
| ·死疫苗 | 第14页 |
| ·亚单位疫苗 | 第14-15页 |
| ·DNA疫苗 | 第15页 |
| ·基因工程疫苗 | 第15-16页 |
| 2 口服疫苗的作用机理及胃肠道粘膜免疫作用机理 | 第16页 |
| ·胃肠道粘膜免疫系统 | 第16页 |
| ·粘膜体液免疫 | 第16页 |
| ·粘膜细胞免疫 | 第16页 |
| 3 腹泻的致病机制 | 第16-20页 |
| ·细菌性痢疾 | 第17页 |
| ·肠毒性大肠杆菌 | 第17-19页 |
| ·霍乱弧菌 | 第19-20页 |
| ·空肠弯曲菌 | 第20页 |
| ·轮状病毒 | 第20页 |
| 4 腹泻疫苗的免疫机制 | 第20-22页 |
| ·霍乱毒素 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌肠毒素 | 第21-22页 |
| ·不耐热肠毒素 | 第21页 |
| ·耐热性肠毒素 | 第21-22页 |
| ·轮状病毒 | 第22页 |
| 5 CTB和CS3以及LTB-ST融合基因的研究 | 第22-26页 |
| ·CTB | 第22-24页 |
| ·CS3 | 第24页 |
| ·LT-B及ST | 第24-26页 |
| ·LT-B | 第24-25页 |
| ·LTB-ST融合基因 | 第25-26页 |
| 6 转基因植物口服疫苗的作用原理 | 第26-29页 |
| ·重组疫苗的生产系统 | 第26-28页 |
| ·微生物系统 | 第26页 |
| ·细菌 | 第26-27页 |
| ·动物细胞 | 第27页 |
| ·植物表达系统 | 第27-28页 |
| ·转基因植物口服疫苗的原理 | 第28-29页 |
| 7 利用转基因生产疫苗的两种生产系统 | 第29-37页 |
| ·稳定表达系统 | 第29-32页 |
| ·稳定表达系统的原理方法及目前进展 | 第29-31页 |
| ·利用稳定转化系统所需解决的问题 | 第31-32页 |
| ·暂态表达系统 | 第32-37页 |
| ·植物病毒表达载体 | 第32-33页 |
| ·植物病毒表达载体的构建策略 | 第33-37页 |
| 8 胡萝卜受体的组织培养研究 | 第37-41页 |
| ·影响胚状体发生和发育的外部条件 | 第38-40页 |
| ·植物激素的作用 | 第38-39页 |
| ·含氮化合物的影响 | 第39-40页 |
| ·其它影响因素的作用 | 第40页 |
| ·影响胚状体发生和发育的内部因素 | 第40-41页 |
| 9 本研究的目的意义 | 第41-43页 |
| 第二章 腹泻疫苗基因对胡萝卜的遗传转化 | 第43-66页 |
| 1 材料和方法 | 第43-48页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·激素、抗生素及其它生化试剂 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·菌株和质粒 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| ·胡萝卜无菌苗的培养 | 第44页 |
| ·培养基组合 | 第44页 |
| ·Kan敏感性的筛选 | 第44-45页 |
| ·农杆菌的活化及侵染用农杆菌菌液的制备 | 第45页 |
| ·无菌苗的预处理 | 第45页 |
| ·共培养时间的确定 | 第45页 |
| ·不同苗龄不同部位的外值体抗性愈伤形成率 | 第45页 |
| ·抗性愈伤的继代培养及抗性胚的培养 | 第45页 |
| ·抗性株的PCR检测 | 第45-46页 |
| ·Southern杂交 | 第46-47页 |
| ·RNA提取 | 第47页 |
| ·RT-PCR | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-60页 |
| ·胡萝卜植株再生体系的建立 | 第48-53页 |
| ·胡萝卜种子的消毒处理 | 第48-49页 |
| ·胡萝卜诱导胚状体最佳培养基的确定 | 第49-53页 |
| ·胡萝卜转化体系的建立 | 第53-56页 |
| ·Kan敏感性的筛选 | 第53-54页 |
| ·共培养时间的确定 | 第54页 |
| ·无菌苗的预处理 | 第54-55页 |
| ·不同苗龄和部位的胡萝卜下胚轴对转化的影响 | 第55-56页 |
| ·胚状体的形成及筛选 | 第56页 |
| ·植株再生和移栽 | 第56页 |
| ·抗性株的分子检测 | 第56-60页 |
| ·抗性株的PCR检测 | 第56-58页 |
| ·转基因PCR阳性株的Southern鉴定 | 第58-59页 |
| ·转基因植株的RT-PCR分析 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-64页 |
| ·有关再生体系建立方面的几个问题 | 第60-62页 |
| ·胡萝卜的器官发生 | 第60-61页 |
| ·遗传型对胡萝卜胚状体发生的影响 | 第61-62页 |
| ·生长素和细胞分裂素对胡萝卜胚状体发生的影响 | 第62页 |
| ·有关基因转化过程中的几个问题 | 第62-63页 |
| ·有关卡那霉素筛选压的确定 | 第62页 |
| ·无菌苗的预处理对转化的影响 | 第62-63页 |
| ·不同苗龄和不同部位对外植体转化的影响 | 第63页 |
| ·关于转基因植物的分子检测及论文的不足之处 | 第63-64页 |
| 4 结论 | 第64-66页 |
| 第三章 利用PVX病毒表达载体转化肠毒素融合基因LTB-ST的研究 | 第66-79页 |
| 1 材料与方法 | 第66-71页 |
| ·试验材料 | 第66-67页 |
| ·菌种 | 第66页 |
| ·质粒 | 第66页 |
| ·各种工具酶和化学试剂 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66-67页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·试验方法 | 第67-71页 |
| ·质粒DNA的提取方法 | 第67页 |
| ·质粒的纯化 | 第67页 |
| ·DNA的限制性酶切 | 第67页 |
| ·DNA的不完全酶切 | 第67页 |
| ·寡核苷酸引物的合成 | 第67-68页 |
| ·目的基因DNA片段的PCR扩增 | 第68页 |
| ·DNA片段的回收 | 第68页 |
| ·DNA片段的连接 | 第68页 |
| ·连接产物的转化 | 第68-69页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第69页 |
| ·阳性克隆基因组测序 | 第69页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第69页 |
| ·冻融法转化农杆菌MOG101 | 第69页 |
| ·转化的MOG101的PCR鉴定 | 第69页 |
| ·三亲融合法转化农杆菌LBA4404 | 第69-70页 |
| ·LBA4404单菌落的PCR鉴定 | 第70页 |
| ·农杆菌对植株的侵染 | 第70页 |
| ·一步法RT-PCR对发病植株的鉴定 | 第70-71页 |
| 2 结果分析 | 第71-77页 |
| ·LTB-ST目的基因的扩增 | 第71页 |
| ·LTB-ST片段的DNA回收及其不完全酶切 | 第71-72页 |
| ·PVX载体的酶切及回收 | 第72页 |
| ·重组克隆PVX-LTB-ST的PCR鉴定 | 第72-73页 |
| ·重组克隆的PCR产物的酶切鉴定 | 第73页 |
| ·重组质粒的核苷酸序列分析 | 第73页 |
| ·重组质粒转化农杆菌MOG101 | 第73页 |
| ·重组质粒转化农杆菌LBA4404 | 第73-74页 |
| ·侵染烟草 | 第74页 |
| ·侵染结果的检测 | 第74-77页 |
| 3 讨论 | 第77-78页 |
| 4 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 附图 | 第88-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |