| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-9页 |
| 2 文献综述 | 第9-23页 |
| 2．1 核型多角体病毒（Nuclear polyhedrosis viruses，NPV） | 第9-10页 |
| 2．2．1 NPV的分类地位 | 第9页 |
| 2．1．2 NPV的形态结构 | 第9页 |
| 2．1．3 NPV多角体的理化性质 | 第9页 |
| 2．1．4 NPV侵染昆虫的过程 | 第9-10页 |
| 2．1．5 NPV的基因表达 | 第10页 |
| 2．2 LdMNPV分子生物学简介 | 第10-19页 |
| 2．2．1 第一张LdMNPV限制性内切酶图 | 第10-14页 |
| 2．2．2 LdMNPV几种基因在其基因组上的定位 | 第14-15页 |
| 2．2．3 egt基因 | 第15-16页 |
| 2．2．4 P39基因 | 第16页 |
| 2．2．5 LdDNA聚合酶基因（DNA pol） | 第16-18页 |
| 2．2．6 PE（polynedron envelope）基因 | 第18页 |
| 2．2．7 多角体蛋白（polyhedrin）基因 | 第18-19页 |
| 2．3 杆状病毒表达系统及杆状重组病毒 | 第19-23页 |
| 2．3．1 杆状病毒表达系统和表达载体 | 第19页 |
| 2．3．2 杆状重组病毒的产生 | 第19-20页 |
| 2．3．3 基因工程病毒杀虫剂（重组病毒杀虫剂） | 第20页 |
| 2．3．4 用于外源基因表达的LdMNPV的基因工程 | 第20-23页 |
| 3 舞毒蛾NPV多角体蛋白基因的克隆、测序、和表达 | 第23-46页 |
| 3．1 研究NPV多角体蛋白基因的意义 | 第23页 |
| 3．2 材料和方法 | 第23-33页 |
| 3．2．1 舞毒蛾NPV（LdMNPV）的获得与纯化 | 第23页 |
| 3．2．2 LdMNPV总DNA的提取 | 第23-24页 |
| 3．2．2．1 蛋白酶K法 | 第23-24页 |
| 3．2．2．2 酚法 | 第24页 |
| 3．2．2．3 碱法 | 第24页 |
| 3．2．3 引物的设计 | 第24-25页 |
| 3．2．4 LdMNPV多角体蛋白基因的分离 | 第25页 |
| 3．2．5 用P~（GEM）T-vector克隆PCR产物 | 第25-26页 |
| 3．2．6 大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第26页 |
| 3．2．7 把3．2．5中的克隆产物转化入DH5α感受态细胞 | 第26页 |
| 3．2．8 蓝/白斑筛选 | 第26页 |
| 3．2．9 LDMNPV多角体蛋白基因——P~（GEM）T-vector克隆的筛选 | 第26-27页 |
| 3．2．9．1 提取克隆质粒 | 第26-27页 |
| 3．2．9．2 克隆的筛选 | 第27页 |
| 3．2．10 LdMNPV多角体蛋白基因的序列测定 | 第27-28页 |
| 3．2．10．1 测序前穿刺（无菌操作） | 第27页 |
| 3．2．10．2 测序 | 第27-28页 |
| 3．2．11 用试剂盒提取插有外源基因（多角体蛋白基因）的T-Vector质粒 | 第28-29页 |
| 3．2．11．1 试剂盒组成 | 第28页 |
| 3．2．11．2 此试剂盒的主要优点 | 第28页 |
| 3．2．11．3 操作步骤 | 第28-29页 |
| 3．2．12 双酶切载有外源基因的T-Vector质粒 | 第29页 |
| 3．2．12．1 用NdeⅠ酶切 | 第29页 |
| 3．2．12．2 抽提酶切产物 | 第29页 |
| 3．2．12．3 用HindⅢ酶切 | 第29页 |
| 3．2．13 从琼脂糖凝胶中回收外源DNA片段（LdMNPV多角体蛋白基因） | 第29-30页 |
| 3．2．14 酶切pT7-7质粒 | 第30页 |
| 3．2．14．1 提取pT7-7质粒 | 第30页 |
| 3．2．14．2 用NdeⅠ酶切pT7-7质粒 | 第30页 |
| 3．2．14．3 用HindⅢ酶切pT7-7质粒 | 第30页 |
| 3．2．15 把LdMNPV多角体蛋白基因克隆连接到pT7-7表达质粒 | 第30-31页 |
| 3．2．16 筛选3．2．15中的阳性克隆产物（连接产物） | 第31页 |
| 3．2．17 LdMNPV多角体蛋白基因在BL21（DE3）菌株中的表达 | 第31页 |
| 3．2．18 用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测LdMNPV多角体蛋白 | 第31-33页 |
| 3．3 结果与分析 | 第33-46页 |
| 3．3．1 LdMNPV多角体蛋白基因的分离 | 第33页 |
| 3．3．2 P~（GEM）T-vector质粒 | 第33-37页 |
| 3．3．2．1 T-vector质粒图谱 | 第33-34页 |
| 3．3．2．2 篮白斑筛选 | 第34-35页 |
| 3．3．2．3 LdMNPV多角体蛋白基因与T-vector连接及蓝/白斑筛选过程 | 第35-36页 |
| 3．3．2．4 LdNPV多角体蛋白基因T-vector的克隆筛选 | 第36-37页 |
| 3．3．3 LdMNPV多角体蛋白基因的序列测定 | 第37-38页 |
| 3．3．4 从T-vector上双酶切LdNPV多角体蛋白基因 | 第38-40页 |
| 3．3．4．1 提取3号质粒 | 第38-39页 |
| 3．3．4．2 HindⅢ和Ndel双酶切3号质粒 | 第39-40页 |
| 3．3．5 pT7-7质粒表达载体及其酶切 | 第40-42页 |
| 3．3．5．1 pT7-7质粒图谱 | 第40-41页 |
| 3．3．5．2 pT7-7质粒NdeⅠ酶切产物 | 第41-42页 |
| 3．3．5．3 pT7-7质粒NdeⅠ和HindⅢ双酶切产物 | 第42页 |
| 3．3．6 把LdMNPV多角体蛋白基因克隆进T7质粒 | 第42-43页 |
| 3．3．7 LdNPV多角体蛋白基因的原核表达 | 第43-46页 |
| 4 问题与讨论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47页 |
| 致谢 | 第47-55页 |
