| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-44页 |
| 第一章昆虫抗冻蛋白的研究进展 | 第15-28页 |
| 1 昆虫抗冻蛋白的特点 | 第15-19页 |
| ·抗冻活性高 | 第15-16页 |
| ·结构规律 | 第16-19页 |
| 2 昆虫抗冻蛋白的生物学活性研究 | 第19-22页 |
| ·抗冻蛋白的热滞活性检测 | 第19-20页 |
| ·昆虫抗冻蛋白的抗冻活性及影响因子 | 第20-21页 |
| ·昆虫抗冻蛋白作用机制的研究 | 第21-22页 |
| 3 昆虫抗冻蛋白的应用 | 第22-23页 |
| ·抗冻蛋白在食品工业中的应用 | 第22页 |
| ·抗冻蛋白在医学上的应用 | 第22-23页 |
| ·抗冻蛋白的基因工程研究与应用 | 第23页 |
| 4 结论与展望 | 第23页 |
| 参考文献 | 第23-28页 |
| 第二章 植物抗寒性及抗寒基因工程研究进展 | 第28-44页 |
| 1 低温引起植物的膜脂相变及转脂肪酸去饱和酶基因的研究 | 第28-29页 |
| 2 抗氧化系统对低温胁迫的生化响应及转抗氧化酶的研究 | 第29-30页 |
| 3 渗透调节物质的积累及转抗渗透胁迫相关基因 | 第30-31页 |
| 4 低温信号转录因子的表达及转抗寒调控基因 | 第31-32页 |
| 5 低温诱导蛋白及转冷诱导基因的研究 | 第32-33页 |
| 6 具有热滞活性的植物抗冻蛋白及转抗冻蛋白基因的研究 | 第33-34页 |
| 7 结论与展望 | 第34-37页 |
| 参考文献 | 第37-44页 |
| 第二部分 研究正文 | 第44-127页 |
| 第一章 烟草高效转化体系的建立 | 第44-55页 |
| 引言 | 第44-45页 |
| 1. 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·无菌苗的获得 | 第45-46页 |
| ·潮霉素临界值的确定 | 第46页 |
| ·农杆菌的培养 | 第46页 |
| ·烟草的转化 | 第46页 |
| ·浸染时间的确定 | 第46页 |
| ·生根培养基的确定 | 第46-47页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第47页 |
| ·烟草种子对潮霉素敏感值的确定 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-51页 |
| ·潮霉素浓度对分化的影响 | 第47-48页 |
| ·浸染时间对转化的影响 | 第48-49页 |
| ·生根筛选培养基的确定 | 第49页 |
| ·抗性植株的PCR 检测 | 第49-50页 |
| ·潮霉素浓度对烟草种子萌发的影响 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 第二章 抗冻蛋白基因 MpAFP149 表达载体的构建及抗血清的制备 | 第55-68页 |
| 引言 | 第55-56页 |
| 1 材料与方法 | 第56-60页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·生化试剂 | 第56-58页 |
| ·抗冻蛋白MpAFP149 基因真核表达载体的构建与鉴定 | 第58页 |
| ·原核表达载体pGEX-4T-1-MpsAFP149 的构建 | 第58页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达和纯化 | 第58-59页 |
| ·抗血清的制备 | 第59页 |
| ·Western blot 检测 | 第59-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-64页 |
| ·真核表达载体pcDNA3-MpAFP149 的构建 | 第60-61页 |
| ·抗冻蛋白MpsAFP149（不含信号肽）原核表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·pGEX4T-1-MpsAFP149 原核表达条件的优化 | 第62-63页 |
| ·抗冻蛋白的Western blot 检测 | 第63-64页 |
| 3. 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 第三章 昆虫抗冻蛋白基因转化烟草抗寒性的研究 | 第68-127页 |
| 引言 | 第69-70页 |
| 第一节 昆虫抗冻蛋白基因单价植物表达载体构建及转化烟草抗寒性研究 | 第70-92页 |
| 1 材料和方法 | 第70-77页 |
| ·材料 | 第70-71页 |
| ·试剂及仪器 | 第71-72页 |
| ·昆虫抗冻蛋白的软件预测分析及瞬时表达 | 第72-73页 |
| ·单价植物表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·烟草的遗传转化及再生植株的检测 | 第74页 |
| ·免疫胶体金 | 第74-75页 |
| ·westernblots | 第75页 |
| ·转基因烟草的抗寒性检测 | 第75-76页 |
| ·低温下细胞器形态结构的观察 | 第76-77页 |
| 2 结果与分析 | 第77-89页 |
| ·抗冻蛋白MpAFP149 的结构特性 | 第77-78页 |
| ·MpAFP149 基因与GFP 基因融合表达载体的构建 | 第78-79页 |
| ·MpAFP149-GFP 融合蛋白在洋葱表皮细胞的亚定位 | 第79-80页 |
| ·单价植物表达载体pCAMBIA1302-MpAFP149 的构建 | 第80-81页 |
| ·转基因烟草的PCR、PCR-Southern 及RT-PCR 检测 | 第81-83页 |
| ·抗冻蛋白MpAFP149 在转基因烟草中的免疫定位及Westernblots | 第83-84页 |
| ·转基因植物的抗寒性检测 | 第84-85页 |
| ·相对电导率和丙二醛含量的测定 | 第85-86页 |
| ·低温胁迫下抗冻蛋白对烟草亚细胞结构的影响 | 第86-89页 |
| 3 讨论 | 第89-92页 |
| 第二节 昆虫抗冻蛋白基因双价植物表达载体构建及转化烟草抗寒性研究 | 第92-105页 |
| 1 材料和方法 | 第92-95页 |
| ·材料 | 第92页 |
| ·生化试剂 | 第92-93页 |
| ·双价植物表达载体的构建 | 第93-94页 |
| ·植物双价表达载体的农杆菌转化及鉴定 | 第94页 |
| ·烟草叶片组织的遗传转化 | 第94页 |
| ·转基因烟草T1 代种苗的筛选 | 第94页 |
| ·再生植株的分子生物学检测 | 第94页 |
| ·柠檬酸合成酶的测定 | 第94页 |
| ·转基因烟草的抗寒实验 | 第94-95页 |
| 2 结果与分析 | 第95-103页 |
| ·扩增烟草柠檬酸合成酶基因 | 第95-98页 |
| ·含有柠檬酸合成酶基因的单双价植物表达载体的构建 | 第98-100页 |
| ·转基因烟草的PCR 检测 | 第100-101页 |
| ·烟草柠檬酸合成酶活力的测定 | 第101-102页 |
| ·转基因植物的抗寒实验 | 第102-103页 |
| 3 讨论 | 第103-105页 |
| 第三节 昆虫抗冻蛋白基因叶绿体表达载体构建及转化烟草抗寒性研究 | 第105-116页 |
| 1 材料和方法 | 第106-109页 |
| ·材料 | 第106页 |
| ·叶绿体植物表达载体的构建 | 第106-108页 |
| ·基因枪转化和转基因的获得 | 第108-109页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第109页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR 分析 | 第109页 |
| ·转基因烟草的抗寒性检测 | 第109页 |
| 2. 结果与分析 | 第109-115页 |
| ·叶绿体表达载体的构建与鉴定 | 第109-111页 |
| ·转基因植株的获得及PCR 检测 | 第111-112页 |
| ·转基因植株的RT-PCR 检测 | 第112-113页 |
| ·转基因植株的抗寒性检测 | 第113-115页 |
| 3 讨论 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-127页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第127-129页 |
| 附录1 英文缩略语 | 第129-131页 |
| 附录2 主要实验仪器 | 第131-132页 |
| 个人简介 | 第132-133页 |
| 博士及硕士期间已发表和待发表的论文 | 第133-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
