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四川白鹅和朗德鹅肝细胞间差异表达基因的筛选及鉴定

摘要第1-6页
Abstract第6-11页
前言第11页
1 文献综述第11-24页
   ·不同鹅种的主要生产性能差异第11-15页
     ·产肝性能第11-12页
     ·生长速度与屠宰性状第12-13页
     ·肉质性状第13-15页
   ·基因差异表达的研究方法第15-20页
     ·消减杂交法(Subtractive Hybridization)第15页
     ·mRNA差异显示(mRNA differential display)第15-16页
     ·代表性序列差异分析(Representational Difference Analysis)第16-17页
     ·基因表达系统分析(serial analysis of gene expression,SAGE)第17页
     ·基因芯片(Gene chips)第17-18页
     ·抑制消减杂交(Suppression subtractive hybridization)第18-20页
   ·抑制消减杂交技术在分离差异表达基因中的应用第20-23页
     ·SSH在医学疾病方面的应用第21页
     ·SSH在动物发育生物学方面的应用第21-22页
     ·SSH在畜禽功能基因组研究中的应用第22-23页
   ·研究的目的和意义第23-24页
2 材料与方法第24-43页
   ·实验样品第24页
   ·仪器和试剂第24-28页
     ·主要仪器设备第24-25页
     ·主要试剂盒和试剂第25页
     ·主要试剂配制第25-28页
   ·试验方法第28-43页
     ·肝脏细胞的培养第28-29页
     ·肝细胞中总RNA的提取第29-30页
     ·mRNA分离纯化第30-31页
     ·抑制性消减杂交第31-37页
     ·消减文库生成第37-39页
     ·消减cDNA文库的斑点杂交筛选第39-41页
     ·序列测定第41页
     ·差异表达EST生物信息学分析第41-43页
3 结果第43-62页
   ·肝细胞的形态及活性变化第43-44页
   ·肝细胞中总RNA提取、MRNA纯化及检测第44-45页
   ·抑制消减杂交第45-49页
     ·双链cDNA(dscDNA)的合成与酶切第45-46页
     ·接头连接效率检测第46页
     ·消减产物第二次PCR扩增第46-47页
     ·消减效率检测第47-49页
     ·消减文库中插入片段的PCR鉴定第49页
   ·斑点杂交第49-50页
   ·差异表达克隆序列分析第50-62页
     ·测序、序列同源性检索及EST分类第51页
     ·差异表达克隆中已知基因序列的分析第51页
     ·差异表达克隆中已知EST分析第51-52页
     ·差异表达克隆中全新的EST第52页
     ·差异表达基因功能相关分析第52-62页
4 讨论第62-70页
   ·肝细胞的分离和纯化第62页
   ·肝细胞的活性检测第62-63页
   ·抑制消减杂交的质量检测第63-64页
   ·斑点杂交筛选阳性差异表达克隆第64页
   ·已分离的差异表达基因的特征第64-70页
     ·肌动蛋白(actin rprotein,ACTB)第65-66页
     ·结缔组织生长因子(conective tissue gowth factor,CTGF)第66-67页
     ·长链脂肪酸延伸酶(Elongation of long-chain fatty acids,ELOVL)第67-68页
     ·丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase)第68-69页
     ·翻译起始因子(eukaryotic translation initiationfactor,eIF)第69-70页
5 结论第70-71页
参考文献第71-79页
致谢第79-80页
攻读学位期间所参与科研项目和发表的学术论文第80页

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